Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD45 murino per IF/ICC, FC - P06800

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di CD45

• CD45, noto anche come antigene comune dei leucociti (L-CA) e Ly-5, è una tirosina fosfatasi proteica di tipo recettore espressa sulla superficie di tutte le cellule ematopoietiche nucleate.
• Svolge un ruolo fondamentale nell’attivazione delle cellule T defosforilando molecole chiave della segnalazione, come SKAP1, FYN e LYN, modulando così le soglie della segnalazione a valle.
• Attraverso l’interazione con DPP4, CD45 agisce come regolatore positivo della coattivazione delle cellule T, potenziando la segnalazione del recettore dell’antigene.
• Nella sinapsi immunologica, CD45 interagisce con CLEC10A sulle cellule dendritiche, riconoscendo CD45 modificato dall’antigene Tn sulle cellule T effettrici per affinare l’attivazione e limitare l’autoreattività.
• La proteina contiene due domini fosfatasici intracellulari disposti in tandem; il primo dominio possiede attività catalitica, mentre il secondo influenza la specificità verso i substrati.
• Lo splicing alternativo genera molteplici isoforme, tra cui B220 (CD45R), espresse in modo differenziale tra i sottogruppi di leucociti, consentendo una regolazione funzionale diversificata.
• CD45 si localizza sulla membrana cellulare, nei raft di membrana e nella sinapsi immunologica, in linea con il suo ruolo nell’avvio della segnalazione e nella modulazione dei corecettori.
• Ampie modifiche post-traduzionali, tra cui la glicosilazione legata all’N e la fosforilazione, regolano la sua stabilità, il legame con i ligandi e l’attività fosfatasica.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo è stato prodotto contro una proteina ricombinante comprendente gli amminoacidi 26–566 di CD45 murino, che include l’intero dominio extracellulare. Si prevede che riconosca un epitopo extracellulare, rendendolo adatto alla colorazione di cellule vive mediante citometria a flusso senza permeabilizzazione.
• Per l’immunofluorescenza è possibile utilizzare una fissazione standard (ad es. PFA al 4%) e, facoltativamente, la permeabilizzazione. Data la topologia transmembrana di CD45, dovrebbe essere osservata una colorazione di membrana.
• Essendo un coniugato diretto , non è richiesto alcun anticorpo secondario. I titoli ottimali devono essere determinati empiricamente per ciascun sistema sperimentale, al fine di ottenere una colorazione specifica con un background minimo.
• Data l’elevata espressione di CD45 sui leucociti, questo anticorpo è ideale per identificare e definire mediante gating le popolazioni di cellule immunitarie in citometria a flusso. Includere controlli isotipici appropriati e controlli fluorescence-minus-one (FMO).

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