Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD8a di topo per citometria a flusso - P01731

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di CD8a

• CD8a (glicoproteina di superficie delle cellule T, catena alfa di CD8), noto anche come Lyt-2, è una glicoproteina integrale di membrana appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline. Svolge un ruolo fondamentale nell'immunità adattativa fungendo da corecettore per le molecole MHC di classe I sulle cellule T.
• Nelle cellule T, CD8a forma eterodimeri con CD8b e interagisce simultaneamente con il recettore delle cellule T (TCR) e con i complessi MHC di classe I:peptide sulle cellule presentanti l'antigene, rafforzando così l'interazione e consentendo l'attivazione delle cellule T.
• In seguito all'interazione con l'MHC di classe I, CD8a recluta la chinasi della famiglia Src LCK nel complesso TCR-CD3, attivando cascate di fosforilazione che portano alla produzione di linfochine, alla motilità cellulare, all'adesione e all'attivazione dei linfociti T citotossici (CTL).
• Nelle cellule natural killer (NK), gli omodimeri di CD8a conferiscono un vantaggio di sopravvivenza facilitando la coniugazione e la lisi sequenziale di molteplici cellule bersaglio, indipendentemente dalla sua funzione di corecettore nelle cellule T.
• La segnalazione di CD8a promuove la sopravvivenza e la differenziazione dei linfociti attivati in cellule T CD8+ della memoria, contribuendo alla memoria immunologica a lungo termine.
• CD8a è una proteina transmembrana localizzata nella membrana cellulare, caratterizzata da un peptide segnale, un dominio extracellulare simile alle immunoglobuline e una coda citoplasmatica palmitoilata.
• La proteina è soggetta a varie modificazioni post-traduzionali, tra cui N-glicosilazione, formazione di legami disolfuro e palmitoilazione, fondamentali per la sua stabilità, il ripiegamento e l'ancoraggio alla membrana.
• Lo splicing alternativo del gene Cd8a produce molteplici isoforme, modulandone potenzialmente l'espressione e la funzione in diversi tipi cellulari.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno (amminoacidi 28–196 di CD8a di topo) corrisponde alla regione extracellulare, rendendo questo coniugato adatto al rilevamento di CD8a sulla superficie cellulare mediante citometria a flusso senza necessità di permeabilizzazione.
• Per la citometria a flusso, titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione ottimale per il proprio tipo cellulare e protocollo di colorazione. Includere un controllo isotipico appropriato e un discriminatore di vitalità cellulare per garantire un gating accurato.
• Incubare con l'anticorpo per 20–30 minuti su ghiaccio al buio, per ridurre al minimo l'internalizzazione dell'antigene e lo sbiadimento del fluoroforo. Lavare accuratamente le cellule per ridurre il legame aspecifico.
• CD8a è espresso sulle cellule T citotossiche e su sottopopolazioni di cellule NK; pertanto, l'anticorpo può essere utilizzato per identificare e caratterizzare fenotipicamente queste popolazioni nei tessuti linfoidi e nel sangue di topo.
• Essendo un anticorpo monoclonale di coniglio, questo reagente offre generalmente un'elevata consistenza tra i diversi lotti e un basso background, ma è sempre necessario convalidarne le prestazioni nel proprio sistema campione.

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