Anticorpo monoclonale di coniglio anti-IgE di topo per citometria a flusso (intracellulare) - P06336

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della regione costante della catena pesante delle IgE di topo

• L'immunoglobulina pesante costante epsilon (catena pesante IgE) è la regione costante delle catene pesanti epsilon delle immunoglobuline, che insieme alle catene leggere formano gli anticorpi IgE.
• Gli anticorpi IgE sono glicoproteine prodotte dai linfociti B; possono esistere come recettori delle cellule B legati alla membrana o come anticorpi secreti presenti nel siero e nelle secrezioni mucose.
• I domini variabili delle catene pesanti e leggere si assemblano attraverso la ricombinazione V(D)J e subiscono ipermutazione somatica dopo l'esposizione all'antigene, consentendo la maturazione dell'affinità per antigeni specifici.
• Le IgE legate alla membrana sulle cellule B fungono da recettori per l'antigene; il legame con l'antigene innesca l'espansione clonale delle cellule B e la differenziazione in plasmacellule secernenti anticorpi.
• Le IgE secrete mediano le funzioni effettrici legandosi ai recettori Fc epsilon ad alta affinità sui mastociti e sui basofili, svolgendo un ruolo centrale nelle risposte allergiche e nella difesa contro i parassiti.
• La regione costante delle IgE contiene molteplici domini immunoglobulinici e la sua struttura è stabilizzata da ponti disolfuro e glicosilazione N-linked (parole chiave UniProt: ponte disolfuro, glicoproteina, dominio immunoglobulinico).
• A livello subcellulare, le IgE si trovano sia sulla membrana cellulare (come recettore delle cellule B) sia secrete nello spazio extracellulare.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Questo anticorpo è coniugato direttamente con , un colorante fluorescente nel rosso lontano compatibile con i comuni strumenti di citometria a flusso; è raccomandato per la colorazione intracellulare (FC intra).
• L'immunogeno copre gli amminoacidi 83–421 della regione costante delle IgE di topo, pertanto l'anticorpo riconosce probabilmente sia le forme di IgE legate alla membrana che quelle secrete dopo la permeabilizzazione.
• Per la citometria a flusso intracellulare, ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione utilizzando cellule di controllo positive e negative appropriate (ad esempio, cellule B di topo esprimenti IgE rispetto a linfociti IgE-negativi).
• Prendere in considerazione l'inclusione di un controllo isotipico e di un colorante per la vitalità nel pannello per distinguere la colorazione specifica.
• Quando si progettano pannelli multicolore, notare che è spettralmente simile ad APC e Alexa Fluor® 647; evitare la co-colorazione con questi coloranti a meno che non sia verificata una corretta compensazione.

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