Anticorpo Monoclonale Coniglio contro Topo IgM per Citometria a Flusso - P01872

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Regione Costante Mu della Catena Pesante delle Immunoglobuline

• La regione costante mu della catena pesante delle immunoglobuline (regione costante della catena pesante IgM) è codificata dal gene Ighm (Igh-6) e costituisce la regione costante degli anticorpi IgM.
• L'IgM legato alla membrana (mIgM) è un componente centrale del complesso recettore delle cellule B (BCR), fornisce la segnalazione tonica costitutiva essenziale per la sopravvivenza delle cellule B e media la segnalazione del pre-BCR che regola la selezione delle cellule B e l'esclusione allelica.
• L'IgM secreta (sIgM) forma multimeri principalmente pentamerici (occasionalmente esameri), conferendo un'alta avidità nel riconoscimento dell'antigene. Le sIgM naturali sono polireattive e riconoscono strutture self e patogene, mentre le sIgM immunitarie sono antigeno-specifiche; entrambe sono necessarie per una risposta immunitaria umorale efficiente. Riferimenti bibliografici: PMID:10899913 PMID:28135254 PMID:34788614
• La sIgM media le funzioni effettrici principalmente attraverso i recettori Fc (es. FCMR sulle cellule linfoidi) e il sistema del complemento. Recluta la C1q per avviare la via classica del complemento e, insieme a C1q e alla lectina legante il mannosio, promuove la fagocitosi delle cellule apoptotiche da parte dei macrofagi, favorendo l'eliminazione degli epitopi autoimmunogeni. Riferimenti bibliografici: PMID:10899913 PMID:11062505 PMID:28135254
• Nell'immunità mucosa, la sIgM viene trasportata attraverso l'epitelio mucoso tramite il recettore polimerico delle immunoglobuline (PIGR) per scansionare la superficie mucosale. I complessi IgM-antigene possono sottoporsi a retrotranscitosi mediata da FCMR attraverso le cellule M verso le cellule presentanti l'antigene nei tessuti linfoidi mucosi. Riferimenti bibliografici: PMID:34788614
• Localizzazione subcellulare: la forma secreta viene rilasciata nello spazio extracellulare; la forma legata alla membrana risiede nella membrana cellulare con un singolo dominio transmembrana.
• Specificità tissutale: espresso nel midollo osseo e nelle cellule B-1 e B-2 (a livello proteico).
• Le modifiche post-traduzionali includono la formazione di ponti disolfuro e la glicosilazione, fondamentali per il corretto ripiegamento e la formazione dei multimeri.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 105-454 della regione costante dell'IgM di topo; pertanto, ci si aspetta che l'anticorpo riconosca il dominio costante di tutte le sottoclassi di IgM di topo indipendentemente dalla specificità della regione variabile.
• Per la citometria a flusso, titolare l'anticorpo su splenociti di topo o linee cellulari B per determinare la concentrazione ottimale di colorazione. Considerare la colorazione simultanea con un marcatore pan-B (es. anti-CD19) per confermare la specificità.
• Il fluoroforo è un colorante nel rosso estremo (eccitazione ~650 nm, emissione ~668 nm). Assicurarsi che il citometro sia equipaggiato con un laser rosso appropriato (es. 633 nm o 640 nm).
• Se si esegue una colorazione intracellulare, ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione, poiché l'epitopo si trova nella regione costante e potrebbe essere preservato dopo la permeabilizzazione.
• Includere un controllo di isotipo (monoclonale di coniglio coniugato allo stesso fluoroforo) per tenere conto del legame non specifico.

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