Rabbit anti-Mouse Ki67 Monoclonal Antibody for Flow Cytometry (Intracellular) - E9PVX6

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Ki67

• La proteina marcatore di proliferazione Ki‑67 (omologo dell'antigene KI‑67), codificata dal gene Mki67, si associa alla superficie dei cromosomi mitotici e svolge un ruolo critico nella dispersione e nell'aggregazione dei cromosomi durante la mitosi.
• Necessario per mantenere i singoli cromosomi mitotici dispersi nel citoplasma dopo la disassemblaggio dell'involucro nucleare, agendo come repellente per i cromosomi durante la mitosi precoce e come attrattivo durante la mitosi tardiva. Riferimenti correlati: PMID:27362226
• Durante la mitosi precoce, Ki‑67 forma strutture estese simili a spazzole che coprono una grande frazione della superficie cromosomica; questa spazzola crea una barriera sterica e di carica elettrostatica, funzionando come un tensioattivo per impedire ai cromosomi di collassare in un'unica massa di cromatina. Riferimenti correlati: PMID:27362226
• In anafase, la spazzola di Ki‑67 collassa; la defosforilazione durante l'uscita dalla mitosi espone una patch basica conservata che induce la separazione di fase liquido-liquido dipendente da RNA, trasformando Ki‑67 in un attrattivo per i cromosomi che promuove il loro raggruppamento.
• Non contribuisce alla struttura interna dei cromosomi mitotici. Riferimenti correlati: PMID:26949251
• Si localizza a livello subcellulare nel cromosoma, nel nucleo e nel nucleolo; presente principalmente nelle cellule in proliferazione. Contiene domini per il legame al DNA (preferendo DNA superavvolto e ricco di AT) ed è soggetta ad acetilazione, fosforilazione e ubiquitinazione.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre la regione C‑terminale (aa 1816‑2163) contenente i domini di ripetizione Ki67 importanti per l'associazione cromosomica; questa regione è relativamente conservata, supportando potenzialmente la reattività incrociata in specie correlate.
• Ottimizzato per la citometria a flusso intracellulare; assicurarsi di utilizzare protocolli appropriati di fissaggio e permeabilizzazione per consentire all'anticorpo di accedere al Ki67 nucleare. Includere controlli isotipici appropriati e convalidare in una linea cellulare di topo nota per la proliferazione.
• Le grandi dimensioni proteiche (351kDa) possono rappresentare una sfida per altre tecniche come il Western blotting; se si esplorano altre applicazioni, considerare tempi di elettroforesi e trasferimento estesi e verificare sempre le prestazioni empiricamente.

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