Anticorpo Monoclonale Conigliato anti-Mouse LAMP1/CD107a per IF/ICC, FC - P11438

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Background Biologico: Funzione e Localizzazione di LAMP1/CD107a

• La glicoproteina di membrana associata ai lisosomi 1 (LAMP1/CD107a) è una proteina transmembrana altamente glicosilata, conosciuta anche come LGP-120, P2B o CD107a.
• È essenziale per la biogenesi dei lisosomi, la regolazione del pH, l'autofagia e l'omeostasi del colesterolo, agendo come inibitore diretto del canale protonico TMEM175 per mantenere l'acidità del lume. Riferimenti bibliografici: PMID:15121881
• Nelle cellule natural killer (NK), LAMP1 partecipa al movimento dei granuli citotossici verso la superficie cellulare e al traffico della perforina verso i granuli litici, permettendo l'eliminazione delle cellule bersaglio.
• Protegge le cellule NK da danni associati alla degranulazione, prevenendo l'autolesione causata dal contenuto dei loro stessi granuli citotossici. Riferimenti bibliografici: PMID:23847195
• Presenta ligandi carboidratici alle selectine ed è stato implicato nella metastasi delle cellule tumorali. Riferimenti bibliografici: PMID:2676155
• Si localizza principalmente sulle membrane dei lisosomi e degli endosomi tardivi, ma viene trasportato verso la membrana cellulare e la membrana dei granuli citolitici dopo attivazione.
• Le modifiche post-traduzionali includono un'estesa glicosilazione N-linked e la formazione di ponti disolfuro, entrambi critici per la stabilità strutturale e la funzione di LAMP1 nell'ambiente lisosomiale.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), utilizzare una fissazione appropriata (ad esempio, PFA al 4%) e permeabilizzazione (ad esempio, Triton X-100 allo 0,1%) per permettere all'anticorpo di accedere ai compartimenti lisosomiali intracellulari. Il fluoroforo coniugato elimina la necessità di un anticorpo secondario, semplificando il protocollo.
• In citometria a flusso (FC), LAMP1 è prevalentemente intracellulare in condizioni di riposo, ma può essere rilevato sulla superficie cellulare dopo attivazione cellulare (ad esempio, durante la degranulazione delle cellule NK). Si consiglia di includere un passaggio di attivazione cellulare e di utilizzare un colorante di vitalità per escludere le cellule morte.
• Validare l'anticorpo in una linea cellulare di topo o un sistema di cellule primarie noto per esprimere LAMP1 (ad esempio, macrofagi RAW 264.7 o cellule NK primarie) e includere controlli di isotipo appropriati per la FC.
• L'immunogeno copre gli amminoacidi 208–363 del dominio luminale, che può essere sensibile alla denaturazione; evitare una fissazione eccessiva che potrebbe mascherare l'epitopo.

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