Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD4 di ratto per citometria a flusso - P05540

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione del CD4

• Il CD4, noto anche come antigene T4/Leu-3 o W3/25, è una glicoproteina di superficie delle cellule T codificata dal gene Cd4 nel ratto.
• Funziona come corecettore integrale di membrana per le molecole MHC di classe II, interagendo con il recettore delle cellule T (TCR) e con le cellule presentanti l'antigene per avviare le risposte immunitarie.
• In seguito all'interazione con l'MHC, il CD4 recluta la chinasi Src LCK, determinando cascate di fosforilazione che promuovono l'attivazione delle cellule T helper, la produzione di linfochine e l'adesione.
• Il CD4 è fondamentale per la differenziazione timica delle cellule T helper e può anche attivare la maturazione da monocita a macrofago in modo indipendente da LCK.
• Oltre che nelle cellule T, l'espressione del CD4 nei macrofagi e nelle cellule NK influenza l'espressione delle citochine e la migrazione cellulare.
• La proteina è localizzata nella membrana cellulare e presenta quattro domini simili alle immunoglobuline, con un peso molecolare previsto di circa 51 kDa.
• Le modifiche post-traduzionali includono la formazione di ponti disolfuro, la glicosilazione e la palmitoilazione, essenziali per la sua struttura e funzione.
• Il CD4 è un marcatore chiave per l'identificazione dei sottogruppi di cellule immunitarie e il principale recettore per l'ingresso dell'HIV nell'uomo (informazioni strutturali disponibili tramite la parola chiave relativa alla struttura 3D).

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Per la citometria a flusso, titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione di lavoro ottimale per la popolazione cellulare e il sistema sperimentale specifici.
• Utilizzare anticorpi di controllo isotipico appropriati coniugati allo stesso fluoroforo () per valutare il legame aspecifico.
• Includere un colorante di vitalità per escludere le cellule morte, che possono causare falsi positivi a causa dell'aumento dell'autofluorescenza.
• Durante la colorazione, incubare al buio a 4°C per ridurre al minimo la modulazione dell'antigene e il fotobleaching del fluoroforo.
• Poiché l'immunogeno comprende gli amminoacidi 1-394, è probabile che l'anticorpo riconosca un epitopo extracellulare, adatto alla colorazione di superficie senza permeabilizzazione. Verificarne le prestazioni qualora sia necessaria la permeabilizzazione.
• Validare la specificità dell'anticorpo utilizzando controlli CD4-positivi (ad esempio splenociti o timociti di ratto) e CD4-negativi.

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