Rat anti-Mouse CD45R/B220 mAb per Citometria a Flusso - P06800

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CD45R/B220 (Fosfatasi proteica tirosinica recettoriale C)

• CD45R/B220, codificato dal gene Ptprc, è una fosfatasi proteica tirosinica recettoriale C (PTPRC), nota anche come antigene comune dei leucociti (L-CA), antigene linfocitario 5 (Ly-5) e T200. Vengono generate multiple isoforme attraverso splicing alternativo, producendo varianti di diverso peso molecolare (es. 130, 140, 144 kDa).
• La PTPRC funge da regolatore positivo critico dell'attivazione delle cellule T: il suo primo dominio fosfatasico possiede attività enzimatica, mentre il secondo modula la specificità del substrato. A seguito dell'ingaggio del recettore delle cellule T, recluta e defosforila molecole di segnalazione come SKAP1 e FYN (per analogia).
• Defosforilla anche la chinasi della famiglia Src LYN, modulando così l'attività della chinasi LYN e influenzando le cascate di segnalazione a valle nei linfociti.
• A livello subcellulare, la PTPRC è localizzata sulla membrana cellulare, arricchita nei raft lipidici di membrana e si concentra alla sinapsi immunologica tra le cellule T e le cellule presentanti l'antigene.
• La PTPRC interagisce con CLEC10A sulle cellule dendritiche immature all'interfaccia cellula T-cellula dendritica; questa interazione riconosce il CD45 recante l'antigene Tn sulle cellule T effettrici, regolando la soglia di attivazione delle cellule T per limitare l'autoimmunità.
• La proteina subisce glicosilazione e fosforilazione, come indicato dalle parole chiave Glicoproteina e Fosfoproteina. È una proteina transmembrana di tipo I con un peptide segnale, un grande dominio extracellulare, un'elica transmembrana singola e due domini fosfatasici intracellulari.
• Nei topi, CD45R/B220 è espresso prevalentemente sui linfociti B e su un sottoinsieme di cellule T, rendendolo un marcatore classico per le linee cellulari B negli studi immunologici.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per la citometria a flusso, titolare l'anticorpo coniugato per determinare la concentrazione ottimale per il tipo di cellule specifico e il protocollo di colorazione, poiché il legame non specifico può essere ridotto tramite una corretta titolazione.
• Includere controlli di isotipo appropriati (IgG di ratto coniugata allo stesso fluorocromo) per impostare i parametri di compensazione e di gating nei pannelli multicolore.
• Validare le prestazioni dell'anticorpo su popolazioni cellulari note positive e negative (es. splenociti di topo in cui le cellule B sono CD45R/B220+ e i sottogruppi di cellule T sono per lo più negativi).
• A causa del grande dominio extracellulare e delle multiple isoforme, assicurarsi che l'immunogeno ricombinante corrisponda all'epitopo riconosciuto da questo clone se la reattività crociata tra le isoforme è critica.
• Conservare l'anticorpo a 2–8°C al riparo dalla luce; evitare cicli ripetuti di congelamento-scongelamento per mantenere la stabilità del coniugato.

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