RELA Rabbit pAb - Q04207

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di RELA/p65

• RELA/p65 è una subunità del complesso del fattore di trascrizione NF-kappa-B, un regolatore pleiotropico presente in quasi tutti i tipi cellulari e con un ruolo centrale nell'infiammazione, nell'immunità, nella differenziazione, nella crescita cellulare, nella tumorigenesi e nell'apoptosi.
• I complessi NF-kappa-B sono omodimeri o eterodimeri formati da RELA, RELB, NFKB1/p105, NFKB1/p50, REL e NFKB2/p52; l'eterodimero RELA-NFKB1 è la forma più abbondante e funziona come attivatore trascrizionale legandosi ai siti kappa-B nei promotori dei geni bersaglio.
• RELA può modulare l'accessibilità dei promotori ai fattori di trascrizione e regolare indirettamente l'espressione genica, contribuendo al suo ampio potenziale regolatorio. Riferimenti correlati: PMID:29813070
• Nelle cellule non stimolate, i dimeri di NF-kappa-B sono sequestrati nel citoplasma dalle proteine inibitorie I-kappa-B; dopo l'attivazione, I-kappa-B viene fosforilata e degradata, liberando RELA affinché traslochi nel nucleo.
• RELA è soggetto a molteplici modificazioni post-traduzionali, tra cui acetilazione e fosforilazione, che regolano finemente la sua attività trascrizionale, l'affinità di legame al DNA e le interazioni con i cofattori.
• A livello proteico, RELA è espresso nel miocardio, suggerendo ruoli tessuto-specifici oltre alle sue funzioni ubiquitarie nella segnalazione.
• La localizzazione subcellulare di RELA è regolata dinamicamente, con un ciclo tra citoplasma e nucleo a seconda dello stato di attivazione della via NF-kappa-B.

Linee guida sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 400–500 all'estremità C-terminale di RELA murino, garantendo il riconoscimento della proteina a lunghezza intera tra specie con elevata omologia. Considerare un allineamento di sequenza se si estende l'utilizzo ad altri organismi.
• Per il Western blot, è attesa una banda di circa 60 kDa; includere controlli positivi appropriati (ad esempio cellule HeLa o RAW 264.7 stimolate) e verificare la specificità utilizzando lisati sottoposti a knockdown o knockout, se disponibili.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, la localizzazione di RELA è tipicamente citoplasmatica nelle cellule a riposo e nucleare in seguito all'attivazione di NF-kappa-B; ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione per preservare questo segnale e utilizzare stimoli appropriati (ad esempio TNF-alfa) per convalidare la traslocazione nucleare.
• Per le applicazioni ELISA, l'abbinamento con un anticorpo di cattura validato può migliorare la sensibilità del test. Titolare l'anticorpo per determinare le concentrazioni di lavoro ottimali nella matrice specifica del campione.

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