Anticorpo monoclonale coniglio SARS-CoV-2 Spike RBD (N501Y) per WB, ELISA - P0DTC2

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di SARS-CoV-2 Spike RBD (N501Y)

• La glicoproteina spike SARS-CoV-2 (S) è una proteina di fusione trimetrica di classe I che media l'attacco virale e l'ingresso nelle cellule ospiti tramite l'interazione con il recettore dell'enzima di conversione dell'angiotensina 2 (ACE2). Riferimenti correlati: PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086
• Viene sintetizzata come una proteina precursore e scissa nelle subunità S1 e S2; la subunità S1 contiene il dominio di legame del recettore (RBD) che si lega all'ACE2, mentre la subunità S2 media la fusione della membrana.
• La scissione della subunità S2 nel sito S2' da parte delle proteasi ospiti TMPRSS2 (alla superficie cellulare) o catepsina L (negli endosomi) espone il peptide di fusione e innesca cambiamenti conformazionali irreversibili necessari per l'ingresso virale. Riferimenti correlati: PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• La proteina spike può utilizzare recettori di ingresso alternativi, inclusi neuropilina-1 (NRP1) e NRP2, integrine e recettore 1 delle asialoglicoproteine (ASGR1), influenzando potenzialmente il tropismo tissutale. Riferimenti correlati: PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• Strutturalmente, il dominio dello stelo (stalk) della proteina S contiene tre cerniere che conferiscono notevole libertà orientazionale al dominio della testa, una caratteristica importante per il coinvolgimento del recettore. Riferimenti correlati: PMID:32817270
• È pesantemente glicosilata e contiene più legami disolfuro; è presente un sito di palmitoilazione nella coda citoplasmatica. La proteina spike si trova sulla membrana del virione, sulla membrana del compartimento intermedio ER-Golgi dell'ospite e sulla membrana cellulare dell'ospite.
• Le parole chiave includono anche: evasione immunitaria virale, inibizione della risposta immunitaria innata dell'ospite e attività superantigenica, indicando ruoli oltre l'ingresso cellulare.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo è stato generato contro un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 450-550 del SARS-CoV-2 Spike RBD (mutante N501Y) e quindi probabilmente riconosce un epitopo all'interno di questa regione; confermare la specificità contro il tipo selvaggio e altre varianti se sono necessari dati di reattività crociata.
• Per il Western blotting (WB), utilizzare condizioni riducenti e considerare la deglicosilazione per migliorare il rilevamento della proteina spike intera di ~141 kDa; convalidare con RBD ricombinante o trimero spike come controllo positivo.
• Nelle applicazioni ELISA, questo anticorpo monoclonale può fungere da reagente di cattura o rilevamento; la concentrazione di rivestimento adeguata e le condizioni di blocco dovrebbero essere ottimizzate nella matrice del campione pertinente.
• A causa del ruolo critico dell'RBD nell'attacco alle cellule ospiti, questo anticorpo può essere utile per studi di neutralizzazione o saggi di legame competitivo, ma tali usi richiedono una convalidazione funzionale indipendente.

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