Anticorpo monoclonale coniglio anti SARS-CoV-2 Spike S1 per WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di SARS-CoV-2 Spike S1

• La glicoproteina Spike (S) media l'ingresso virale legandosi al recettore dell'enzima di conversione dell'angiotensina 2 (ACE2) dell'ospite, un passaggio chiave nell'iniziare l'infezione. Riferimenti correlati: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Recettori alternativi come neuropilina-1 (NRP1)/NRP2, recettore dell'asialoglicoproteina 1 (ASGR1) e integrine possono anch'essi facilitare l'ingresso del virus, il che può contribuire al tropismo per le cellule epiteliali olfattive che esprimono bassi livelli di ACE2. Riferimenti correlati: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• La proteina S viene scissa da proteasi dell'ospite nelle subunità S1 (legame al recettore) e S2 (fusione di membrana); la scissione al sito S2' da parte di TMPRSS2 o catepsina L è essenziale per l'attivazione della fusione. Riferimenti correlati: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• Dopo la scissione, la subunità S2 subisce un drammatico riarrangiamento conformazionale da uno stato pre-fusione a un trimerico a forcella post-fusione, avvicinando le membrane virali e cellulari per la fusione.
• Subcellularmente, la proteina spike si localizza sulla membrana del virione, sulla membrana del compartimento intermedio reticolo endoplasmatico-Golgi (ERGIC) dell'ospite e sulla membrana cellulare dell'ospite, riflettendo il suo ciclo di traffico e gemmazione.
• La proteina S possiede proprietà simili a superantigeni e partecipa all'immunoevasione virale, inibendo le risposte immunitarie innate dell'ospite e contrastando fattori di restrizione come la tetherina.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Progettazione dell'immunogeno: L'anticorpo è stato generato contro un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 200–300 all'interno della subunità S1 (YP_009724390.1), una regione che si sovrappone al dominio di legame al recettore. Questo epitopo è conservato in molti isolati di SARS-CoV-2, suggerendo un'ampia reattività.
• Per il Western blot (WB), la proteina spike a lunghezza intera ha un peso molecolare previsto di ~141 kDa; tuttavia, a seconda della preparazione del campione, può essere rilevata la presenza di prodotti di scissione S1 (circa 80 kDa). Validare utilizzando lisati di cellule infettate da SARS-CoV-2 o proteina S1 ricombinante.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), considerare protocolli di permeabilizzazione per rilevare la proteina spike intracellulare in cellule infettate. La colorazione multipla con marcatori di organelli può aiutare a studiare la localizzazione subcellulare.
• Per applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento per la quantificazione della proteina S1 ricombinante o delle particelle virali. Il titolo e la reattività incrociata dovrebbero essere confermati contro le varianti pertinenti di SARS-CoV-2.
• Come per tutti gli anticorpi da ricerca, le diluizioni di lavoro ottimali devono essere determinate empiricamente per ogni saggio e tipo di campione.

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