Anticorpo Monoclonale di Coniglio Smac/Diablo per WB, IF/ICC, ELISA - Q9NR28

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di Smac/Diablo

• Diablo (proteina legante IAP diretta con pI basso), nota anche come Secondo attivatore di caspasi derivato dai mitocondri (SMAC), è una proteina pro-apoptotica che promuove l'apoptosi attivando le caspasi nella via del citocromo c/Apaf-1/caspasi-9.
• Funziona opponendosi all'attività inibitoria delle proteine inibitrici dell'apoptosi (IAP), inibendo specificamente il legame di BIRC6/BRUCE alle caspasi. Riferimenti correlati: PMID:15200957 PMID:36758104 PMID:36758105
• Diablo attenua la stabilità e l'attività inibitoria dell'apoptosi di XIAP/BIRC4 promuovendone l'ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale, e interrompe l'interazione di XIAP con la caspasi-9 processata per attivare la caspasi-3.
• La proteina è localizzata nel mitocondrio e viene rilasciata nel citosol in seguito a stimoli apoptotici.
• È espressa in modo ubiquitario, con i livelli più alti nel testicolo, ed è anche altamente espressa in cuore, fegato, rene, milza, prostata e ovaio; meno nel cervello, polmone, timo e leucociti del sangue periferico.
• Lo splicing alternativo produce più isoforme e mutazioni in questo gene sono associate a sordità non sindromica (DFNA64).
• Le modifiche post-traduzionali includono la coniugazione con ubiquitina e la proteina contiene un peptide di transito per il targeting mitocondriale.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 56–239 di Smac/Diablo umano maturo, coprendo la regione funzionale dopo il processing mitocondriale; è adatto per rilevare la proteina endogena matura (~23 kDa, forma processata) e possibilmente il precursore a lunghezza intera.
• Per il Western blotting (WB), considerare l'uso di lisati mitocondriali o di cellule intere; il peso molecolare previsto del precursore a lunghezza intera è 27 kDa, mentre la forma matura dopo il taglio del peptide di transito migra a circa 23 kDa. Ottimizzare di conseguenza le condizioni di lisi e caricamento.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), si può osservare la localizzazione mitocondriale in condizioni di stato stazionario; dopo l'induzione dell'apoptosi, la colorazione può spostarsi nel citosol.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per catturare o rilevare Smac/Diablo ricombinante o endogeno; si consiglia di accoppiarlo con un anticorpo di rilevamento contro un epitopo non sovrapposto per una sensibilità ottimale.
• È specificata la reattività incrociata con topo e ratto; quando si lavora con queste specie, validare l'anticorpo nel sistema tissutale o cellulare rilevante per confermare reattività e specificità.

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