Anticorpo monoclonale di coniglio contro Histone H3-R17 simmetrico dimetilato (Q16695/P68431) per WB, DB, IHC-P, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3

L'istone H3 è una componente fondamentale del nucleosoma, che avvolge e compatta il DNA nella cromatina. Questa compattazione limita l'accessibilità del DNA per i meccanismi cellulari e svolge un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. L'accessibilità del DNA è regolata dinamicamente dalle modificazioni post-traduzionali (PTM) degli istoni, collettivamente note come "codice istonico", insieme al rimodellamento dei nucleosomi. Riferimenti bibliografici: PMID:19608861, PMID:17194708

H3 si localizza nel nucleo ed è associato ai cromosomi. Due isoforme umane principali sono rappresentate dalle voci SWISS Q16695 (istone H3.1t, specifico del testicolo) e P68431 (istone H3.1, espresso diffusamente). Mentre H3.1t è espresso prevalentemente nelle cellule testicolari, l'istone canonico H3.1 è presente nella maggior parte dei tessuti, evidenziando la regolazione specifica delle isoforme delle funzioni della cromatina. Riferimenti bibliografici: Specifità tissutale UniProt Q16695

La metilazione dell'arginina degli istoni, inclusa la dimetilazione simmetrica, è una PTM critica. L'enzima PRMT5 catalizza la dimetilazione simmetrica dei residui di arginina, come il ben caratterizzato sito R9, influenzando la regolazione trascrizionale e l'organizzazione della cromatina. La dimetilazione simmetrica nel sito R17 dell'istone H3, bersaglio di questo anticorpo, rappresenta una modificazione correlata all'interno del panorama della metilazione istonica. Sebbene le funzioni specifiche del R17 simmetricamente dimetilato siano meno definite, è probabile che partecipi all'attivazione o al silenziamento genico a seconda del contesto genomico. Riferimenti bibliografici: PMID:16267050, PMID:17194708

Numerose altre modificazioni sono presenti su H3, tra cui acetilazione, fosforilazione, citrullinazione e ADP-ribosilazione, ciascuna con macchinari enzimatici dedicati e risultati funzionali distinti. Questo anticorpo rappresenta uno strumento per studiare il ruolo preciso del R17 simmetricamente dimetilato nel complesso codice istonico.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Confermare la specificità dell'anticorpo mediante saggi di competizione peptidica; prevedere l'incubazione dell'anticorpo sia con il peptide simmetrico dimetil-R17 che con la controparte non modificata per convalidare il legame specifico per la modificazione.
• Per il Western Blot, arricchire le frazioni di proteine nucleari per aumentare il segnale e verificare la banda prevista di ~15 kDa nei lisati cellulari rilevanti (ad esempio HeLa, tessuto testicolare se si utilizza l'isoforma H3.1t).
• Nelle applicazioni IHC-P, ottimizzare il recupero dell'antigene (ad esempio, tampone citrato pH 6,0 o EDTA pH 9,0) e includere controlli negativi (isotipo IgG di coniglio) per garantire la specificità della colorazione.
• La rilevazione basata su ELISA può essere eseguita utilizzando peptidi modificati e non modificati come antigeni di rivestimento; convalidare la linearità e la sensibilità nell'intervallo di concentrazione appropriato.
• La reattività crociata è prevista su un ampio spettro di specie; convalidare sempre nel sistema di campione specifico di interesse per garantire il riconoscimento previsto dell'endogeno simmetrico dimetil-H3-R17.

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