Anticorpo policlonale di coniglio anti-Symmetric DiMethyl-Histone H3-R8 (Q16695/P68431) per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA, ChIP-seq

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di Histone H3.1t / Histone H3.1

Le varianti dell'istone H3 (inclusa H3.1t codificata da H3-4/HIST3H3 e H3.1 codificata da cluster genici multipli come H3C1-H3C12) sono componenti fondamentali del nucleosoma. I nucleosomi avvolgono e compattano il DNA in cromatina, limitandone l'accessibilità e svolgendo un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, riparazione del DNA, replicazione del DNA e stabilità cromosomica.

Riferimenti correlati: UniProt P68431

• Queste istoni sono soggette a un complesso insieme di modificazioni post-traduzionali (PTM), collettivamente denominate "codice istonico", che regolano la dinamica della cromatina e l'espressione genica. Tra queste, la dimetilazione simmetrica dell'arginina in posizione 8 (R8) nell'istone H3 maturo (corrispondente ad Arg9 nella sequenza UniProt) è catalizzata dalla protein arginine methyltransferase 5 (PRMT5). Questa modificazione è associata alla repressione trascrizionale e alla formazione di eterocromatina.

Riferimenti correlati: UniProt Q16695

• L'istone H3.1t (UniProt Q16695) è una variante testicolo-specifica espressa principalmente nelle cellule testicolari, mentre H3.1 (UniProt P68431) rappresenta le forme somatiche canoniche.
• Localizzazione subcellulare: Entrambe le varianti sono localizzate nel nucleo e nei cromosomi.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Western Blot (WB): Prevedere una banda a circa 15 kDa. Utilizzare controlli positivi e negativi appropriati (es. cellule non trattate vs. cellule trattate con inibitore di PRMT5) per confermare la specificità per la dimetilazione simmetrica. Considerare saggi di competizione con peptide per validare il legame dell'anticorpo all'epitopo R8me2s.
• Immunoistochimica (IHC-P) e Immunofluorescenza (IF/ICC): Ottimizzare i passaggi di fissazione e permeabilizzazione, poiché l'accessibilità dell'epitopo può variare. Poiché l'istone H3 è nucleare, assicurarsi un pattern di colorazione nucleare e confrontarlo con la colorazione totale dell'istone H3 o con la controcolorazione DAPI.
• ELISA: Questo anticorpo può essere utilizzato per ELISA diretto o indiretto per quantificare i livelli di dimetilazione simmetrica. Titrare la concentrazione dell'anticorpo e includere agenti di bloccaggio appropriati.
• ChIP-seq: A causa dell'elevata abbondanza dell'istone H3, ottimizzare la cross-link e il taglio della cromatina. Utilizzare materiale di input minimo e validare l'efficienza del ChIP con loci genomici positivi e negativi (es. regioni eterocromatiche vs. eucromatiche).
• Consiglio generale: Includere sempre un controllo con peptide non modificato per distinguere il segnale specifico della modificazione.

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