Anticorpo policlonale coniglio per Simmetrica DiMetil-Istone H4-R3 (P62805) per WB, IHC, IF/ICC, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'Istone H4

• L'Istone H4 è una delle istoni core che formano il nucleosoma, l'unità fondamentale della cromatina. Insieme alle istoni H2A, H2B e H3, un ottamero di istoni avvolge circa 147 bp di DNA, compattandolo e regolando l'accesso al materiale genetico.
• Questo impacchettamento è essenziale per i processi basati sul modello DNA, tra cui la trascrizione, la replicazione, la riparazione e il mantenimento della stabilità cromosomica. La regolazione dinamica della struttura della cromatina è governata dalle modificazioni post-traduzionali (PTM) sulle istoni, spesso indicate come "codice istonico".
• L'Istone H4 si trova principalmente nel nucleo ed è associata ai cromosomi. Può essere localizzata nel nucleo quando si verificano modificazioni specifiche, per esempio l'acetilazione durante la spermatogenesi.
• H4 subisce una vasta gamma di PTM, tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione, citrullinazione e diverse acilazioni. Queste modificazioni avvengono su più residui e regolano eventi a valle distinti.
• La dimetilazione simmetrica dell'arginina 3 (H4R3me2s) è catalizzata dalle protein arginina metiltransferasi PRMT5 e PRMT7. Questa modificazione è implicata nella regolazione trascrizionale ed è uno dei molti marchi che compongono il codice istonico. Riferimenti correlati: UniProt P62805.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Questo anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico che comprende gli amminoacidi 1-100 dell'Istone H4 umana (NP_003529.1), con dimetilazione simmetrica all'Arg3. La progettazione dell'immunogeno suggerisce specificità per la forma modificata, ma è necessario valutare la reattività incrociata con forme non modificate o altre forme modificate.
• Per il Western blotting (WB), il peso molecolare previsto dell'Istone H4 è di ~11 kDa. Si consiglia di utilizzare estratti nucleari o preparazioni arricchite di istoni come controlli positivi. Ridurre e denaturare i campioni prima del caricamento.
• Nell'immunohistochimica (IHC) e nell'immunofluorescenza (IF/ICC), potrebbe essere necessario il recupero dell'antigene per esporre l'epitopo, specialmente nei tessuti fissati in formalina e inclusi in paraffina. Provare diversi metodi di recupero dell'antigene.
• Validare la specificità dell'anticorpo includendo controlli appropriati, come saggi di competizione peptidica o il confronto con cellule trattate con inibitori della metiltransferasi.
• A causa dell'elevata conservazione della sequenza dell'Istone H4, si prevede che l'anticorpo reagisca con un'ampia gamma di specie; verificare comunque la reattività nel vostro sistema modello specifico.
• Ottimizzare empiricamente i fattori di diluizione per ogni applicazione; le diluizioni iniziali tipiche possono essere adattate da protocolli esistenti per anticorpi policlonali diretti contro modificazioni istoniche.

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