Anticorpo Policlonale di Coniglio TLR4 per WB, IF/ICC, ELISA - O00206

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di TLR4

• Il recettore Toll-like 4 (TLR4) è un recettore transmembrana di riconoscimento di pattern che riconosce pattern molecolari associati a patogeni e danni (PAMPs e DAMPs) per avviare risposte immunitarie innate. Riferimenti correlati: PMID:10835634 PMID:15809303 PMID:16622205
• Alla membrana plasmatica, TLR4 coopera con LY96 (MD-2) per mediare la risposta immunitaria innata al lipopolisaccaride batterico (LPS). Riferimenti correlati: PMID:27022195
• TLR4 segnala tramite MYD88 e TIRAP portando all'attivazione di NF-kappa-B e alla secrezione di citochine proinfiammatorie, mentre l'internalizzazione mediata da CD14 innesca una via indipendente da MYD88 tramite TICAM1-TBK1-IRF3 per la produzione di interferone di tipo I. Riferimenti correlati: PMID:10835634 PMID:21393102 PMID:27022195 PMID:14517278
• In complesso con TLR6, TLR4 promuove l'infiammazione nei monociti/macrofagi e innesca l'internalizzazione e la segnalazione indotta da ligando per la produzione di citochine specifiche. Riferimenti correlati: PMID:23880187
• TLR4 è anche coinvolto nelle risposte infiammatorie indipendenti da LPS innescate da acidi grassi liberi e Ni(2+), e avvia l'attivazione dell'inflammasoma NLRP3. Riferimenti correlati: PMID:20711192 PMID:32894580
• A livello subcellulare, TLR4 si localizza alla membrana cellulare, agli endosomi precoci e alle sporgenze cellulari come le ruffles.
• TLR4 è altamente espresso nella placenta, nella milza e nei leucociti del sangue periferico, e rilevato in monociti, macrofagi, cellule dendritiche e cellule T; è anche espresso nelle cellule del cancro al pancreas. Riferimenti correlati: PMID:9237759 PMID:9435236 PMID:27022195 PMID:36232715
• La proteina contiene ripetizioni ricche di leucina, un legame disolfuro ed è glicosilata; appartiene alla famiglia dei recettori Toll-like ed è un attore chiave nell'immunità innata e nelle risposte infiammatorie.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 27-228 di TLR4 umano, coprendo il dominio extracellulare a ripetizioni ricche di leucina; questa regione è critica per il riconoscimento del ligando e la dimerizzazione del recettore.
• Per il Western blotting (WB), ci si aspetta una banda vicina a 96kDa; tuttavia, la glicosilazione e la potenziale dimerizzazione possono portare a specie di peso molecolare leggermente superiore. Validare utilizzando controlli positivi appropriati (es. cellule THP-1, lisati di splenociti).
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), TLR4 può essere rilevato alla membrana cellulare, negli endosomi e nelle ruffles. Ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione per il vostro tipo cellulare; considerare la co-colorazione con marcatori per questi compartimenti.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per catturare o rilevare TLR4; confermare le prestazioni con proteina ricombinante o lisati cellulari di origine umana o murina.
• Essendo un anticorpo policlonale, può riconoscere più epitopi, il che può aumentare la sensibilità di rilevamento ma può anche presentare un fondo più alto; sono raccomandati la titolazione e l'ottimizzazione del blocco.
• È indicata la reattività incrociata con TLR4 umano e murino; verificare la reattività nel vostro specifico sistema sperimentale se si utilizzano altre specie.

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