Anticorpo policlonale di coniglio contro TriMetil-Istona H3-K14 (Q16695 / P68431) per WB, IF, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'Istona H3

L'Istona H3 è un componente centrale del nucleosoma, l'unità fondamentale della cromatina. Insieme a H2A, H2B e H4 forma il core ottamerico istonico attorno al quale si avvolge il DNA, compattando il genoma e regolando l'accessibilità al DNA stesso. Questo ruolo strutturale è centrale per processi come la regolazione della trascrizione, la riparazione del DNA, la replicazione del DNA e la stabilità cromosomica. La funzione dell'Istona H3 è controllata dinamicamente da una complessa serie di modifiche post-traduzionali (PTM), tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione e altre, collettivamente definite "codice istonico". Queste modifiche alterano la struttura della cromatina e fungono da piattaforme di legame per le proteine effettrici.

L'Istona H3 si localizza principalmente nel nucleo ed è distribuita lungo i cromosomi. Esistono diverse varianti di H3: le varianti canoniche H3.1 e H3.2, la variante H3.3 indipendente dalla replicazione e la variante H3.1t specifica del testicolo (codificata da H3-4/HIST3H3). Secondo UniProt, la variante H3.1t (Q16695) è espressa specificamente nelle cellule testicolari, mentre la variante principale H3.1 (P68431) è ubiquitaria. Entrambe le isoforme condividono un alto grado di identità di sequenza e subiscono PTM simili.

Il residuo K14 dell'Istona H3 è un sito ben conosciuto per molteplici PTM, tra cui l'acetilazione (H3K14ac) e la metilazione. La trimetilazione di H3K14 (H3K14me3) è una modificazione recentemente identificata che potrebbe svolgere ruoli nella regolazione della cromatina e nell'espressione genica. Questo anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico che copre la coda N-terminale (aa1-100), la regione che sporge dal nucleosoma e che presenta il maggior numero di modificazioni. È previsto che rilevi specificamente la forma trimetilata di K14.

Riferimenti correlati: UniProt Q16695 UniProt P68431

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla coda N-terminale (aa 1-100) dell'Istona H3 umana. Questa regione è altamente conservata, il che spiega l'ampia reattività incrociata prevista. Tuttavia, poiché questo anticorpo è diretto contro una PTM specifica (K14 trimetilato), si raccomanda la validazione nel sistema cellulare o tissutale di interesse per confermare reattività e specificità.
• Per il Western blotting, gli istoni sono legati fortemente al DNA nucleare; pertanto, protocolli di estrazione acida o arricchimento di istoni possono migliorare la rilevazione. Utilizzare controlli di caricamento appropriati (ad esempio, H3 o H4 totali) per normalizzare le differenze di caricamento.
• Per l'immunofluorescenza/ICC, la fissazione con paraformaldeide seguita da permeabilizzazione con Triton X-100 è tipicamente efficace per bersagli nucleari. Tuttavia, l'epitopo può essere sensibile a una fissazione eccessiva; ottimizzare il tempo di fissazione e la concentrazione di detergente.
• Poiché gli anticorpi specifici per PTM possono presentare una certa reattività incrociata con altre modificazioni, si consiglia di utilizzare saggi di competizione peptidica (ad esempio, pre-incubando l'anticorpo con il peptide K14 trimetilato rispetto al peptide non modificato o mono/di-metilato) per verificare la specificità nelle vostre condizioni sperimentali.
• L'ELISA è indicata come applicazione; per il coating, possono essere utilizzati peptidi istonici o nucleosomi purificati. Assicurarsi che il coating copra adeguatamente l'epitopo K14me3.

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