Anticorpo monoclonale di topo TriMetil-Istone H3-K27 (P68431) per ChIP, CUT&Tag, WB e IHC

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3.1

• L'istone H3.1 è un componente fondamentale del nucleosoma, l'unità ripetitiva di base della cromatina. I nucleosomi avvolgono e compattano il DNA, regolando l'accesso all'informazione genetica.
• Come istone chiave, H3 svolge un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. L'accessibilità al DNA è controllata da un complesso insieme di modifiche post-traduzionali (PTM), collettivamente chiamate "codice dell'istone", che coinvolgono anche il rimodellamento dei nucleosomi.
• La coda N-terminale dell'istone H3 è soggetta a una vasta gamma di PTM, tra cui metilazione, acetilazione, fosforilazione, citrullinazione e altre. Questi marcatori sono dinamici e orchestrano vari processi basati sulla cromatina.
• La trimetilazione della lisina 27 (H3K27me3) è un marcatore repressivo ben caratterizzato associato al silenziamento genico e alla formazione dell'eterocromatina, depositato principalmente dal complesso repressivo Polycomb 2 (PRC2).
• Subcellularmente, l'istone H3.1 è localizzato nel nucleo e si associa ai cromosomi.

Riferimenti correlati: UniProt P68431

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Questo anticorpo è stato ottenuto contro un peptide trimetilato sintetico che comprende i residui intorno alla posizione K27. Ci si aspetta che riconosca specificamente la forma trimetilata dell'istone H3 alla lisina 27 e che non presenti reattività incrociata con stati non modificati o altri stati di metilazione. Si consiglia di convalidare la specificità con saggi di competizione peptidica o controlli positivi/negativi appropriati.
• Per l'analisi Western blot, l'estrazione degli istoni tramite protocolli di estrazione acida migliora spesso il segnale e riduce il fondo. Utilizzare un controllo di caricamento come l'istone H3 totale o l'istone H4.
• Per l'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) e CUT&Tag, ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo e le condizioni di reticolazione. L'elevata specificità per H3K27me3 lo rende adatto alla mappatura di questo marcatore repressivo a livello dell'intero genoma.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), può essere necessario il recupero dell'antigene (ad esempio, recupero epitopico indotto dal calore) per esporre l'epitopo. Convalidare il pattern di colorazione nel tessuto e nel tipo cellulare di interesse.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), le condizioni di fissazione e permeabilizzazione devono essere scelte attentamente per preservare l'architettura della cromatina e l'accessibilità all'epitopo.
• Sebbene questo anticorpo sia fornito per più applicazioni, testare sempre preliminarmente le diluizioni e le condizioni nel vostro sistema sperimentale specifico per garantire prestazioni ottimali.

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