Anticorpo monoclonale di coniglio contro TriMetil-istone H3-K27 (Q16695/P68431) per ChIP, CUT&Tag, WB

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di TriMetil-istone H3 (K27)

L'istone H3 è una proteina istonica core che, insieme a H2A, H2B e H4, forma il nucleosoma, l'unità ripetitiva fondamentale della cromatina. Come componente core del nucleosoma, l'istone H3 avvolge il DNA, lo condensa in cromatina e regola l'accesso all'informazione genetica sottostante. Questo ruolo strutturale è fondamentale per mantenere la stabilità cromosomica e controllare i processi nucleari chiave, tra cui la trascrizione, la replicazione del DNA e la riparazione del DNA.

L'istone H3 è soggetto a una vasta gamma di modifiche post-traduzionali (PTM) sulla sua coda N-terminale flessibile, tra cui metilazione, acetilazione, fosforilazione e citrullinazione. Queste modifiche, spesso chiamate "codice istonico", regolano dinamicamente la struttura e la funzione della cromatina. La trimetilazione specifica della lisina 27 (H3K27me3) è un marcatore represivo ben caratterizzato, depositato dal complesso represivo poliombico 2 (PRC2) ed è associato al silenziamento genico, all'inattivazione del cromosoma X e alla regolazione dello sviluppo.

La variante H3.1 (UniProt P68431) è ampiamente espressa e costituisce la maggior parte dell'istone H3 nelle cellule somatiche, mentre H3.1t (H3-4, UniProt Q16695) è espressa principalmente nelle cellule testicolari. Entrambe le varianti si localizzano nel nucleo e nel cromosoma, dove partecipano all'assemblaggio del nucleosoma e all'organizzazione della cromatina.

Riferimenti correlati: UniProt Q16695, UniProt P68431

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Informazioni sull'immunogeno: L'anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico trimetilato che comprende la lisina 27 (K27) dell'istone H3 umano. Questo progetto garantisce il riconoscimento specifico della modificazione H3K27me3. Per le applicazioni che richiedono la discriminazione tra diversi stati di metilazione, convalidare la specificità mediante saggi di competizione peptidica.
• Western Blot (WB): Il peso molecolare previsto dell'istone H3 è di circa 15 kDa. Utilizzare percentuali di gel appropriate (ad esempio, SDS-PAGE al 15%) per una separazione ottimale. Includere controlli positivi e negativi (ad esempio, cellule trattate con inibitori di EZH2 per ridurre H3K27me3) per confermare la specificità della banda.
• ChIP e CUT&Tag: Questo anticorpo è adatto per saggi di immunoprecipitazione della cromatina e CUT&Tag per mappare la distribuzione di H3K27me3 a livello genomico o in loci specifici. Ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo per ogni quantità di input di cromatina e includere controlli IgG appropriati.
• ELISA: Utilizzare il peptide immunogeno come controllo positivo per generare curve standard. Tenere conto che l'anticorpo può reagire in modo crociato con peptidi contenenti motivi trimetilati simili; convalidare nel sistema di campioni pertinente.

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