Anticorpo monoclonale di coniglio contro TriMetil-Istone H3-K27 (Q16695/P68431) per applicazioni WB, ChIP e CUT&Tag

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3

L'istone H3 è una proteina istonica core che, insieme a H2A, H2B e H4, forma il nucleosoma, l'unità ripetitiva fondamentale della cromatina. I nucleosomi avvolgono e compattano il DNA, controllando quindi l'accessibilità delle informazioni genetiche ai macchinari cellulari responsabili della trascrizione, la replicazione e la riparazione. Questo ruolo centrale rende gli istoni regolatori chiave della stabilità genomica e dell'espressione genica.

La versatilità funzionale degli istoni è mediata in gran parte da una vasta gamma di modifiche post-traduzionali (PTM), collettivamente definite "codice istonico". Queste modifiche, tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione e altre, si verificano su residui specifici e regolano la dinamica della cromatina. Tra queste, la trimetilazione dell'istone H3 sulla lisina 27 (H3K27me3) è un marcatore repressivo ben consolidato, associato alla formazione dell'eterocromatina facoltativa e al silenziamento genico a lungo termine.

Questo anticorpo monoclonale di coniglio è stato generato contro un peptide sintetico trimetilato che comprende la regione K27 dell'istone H3 umano (basato su NP_003520.1). Riconosce specificamente l'istone H3 solo quando è trimetilato su K27, consentendo la rilevazione precisa di questo marcatore epigenetico in diversi saggi.

Riferimenti correlati: PMID:16267050, PMID:17194708

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico trimetilato intorno alla K27; pertanto, si prevede che questo anticorpo possieda un'elevata specificità per lo stato trimetilato. Si consiglia di verificare la specificità tramite dot blot o saggi di competizione peptidica utilizzando peptidi non modificati, mono-, di- e trimetilati.
• Per Western blot (WB), si consigliano estratti nucleari ricchi di istoni o istoni estratti con acido. La banda prevista è di ~15 kDa. Utilizzare controlli di caricamento appropriati (ad esempio, l'istone H3 totale o un anticorpo contro il terminale C dell'istone H3) per normalizzare il caricamento delle proteine.
• Nell'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP), questo anticorpo può essere utilizzato per arricchire le regioni cromatiniche marcate da H3K27me3. Ottimizzare la shearizzazione della cromatina e la concentrazione dell'anticorpo per ogni tipo cellulare. Includere regioni di controllo positive (ad esempio, loci dei geni HOX) e negative (ad esempio, promotori di geni housekeeping) nell'analisi qPCR.
• Per la tecnica CUT&Tag (Cleavage Under Targets & Tagmentation), l'anticorpo può fungere da anticorpo primario per il targeting e la clivaggio in situ. Seguire il protocollo del produttore per approcci basati su beads o di legame diretto. L'analisi su tutto il genoma può rivelare la distribuzione di H3K27me3 nel genoma.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC) e nell'immunoistochimica (IHC-P), è prevista una colorazione nucleare. Ottimizzare le condizioni di fissazione (ad esempio, PFA al 4% per IF, sezioni fissate in formalina e incluse in paraffina per IHC) e permeabilizzazione. Il bloccaggio con siero/BSA può ridurre al minimo il fondo.
• Convalidare sempre l'anticorpo nel sistema di campioni e nel contesto applicativo di interesse. Titolare l'anticorpo e includere controlli appropriati per garantire risultati riproducibili.

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