Anticorpo Policlonale di Coniglio TriMetil-Istone H3-K4 (H3K4me3) – Q16695/P68431 per ChIP-seq & WB

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Istone H3

L'istone H3 è una proteina istonica core che, insieme a H2A, H2B e H4, si assembla nel nucleosoma, l'unità ripetitiva fondamentale della cromatina. I nucleosomi compattano il DNA e ne regolano l'accessibilità ai macchinari cellulari, svolgendo un ruolo centrale nella trascrizione, replicazione, riparazione e stabilità cromosomica. Le modifiche post-traduzionali degli istoni, collettivamente note come "codice istonico", controllano dinamicamente la struttura della cromatina e l'espressione genica. Riferimenti correlati: UniProt Q16695/P68431

La trimetilazione della lisina 4 sull'istone H3 (H3K4me3) è un segno distintivo dei promotori genici attivi ed è intimamente legata all'inizio e all'elongazione trascrizionale. Questa modifica è depositata da specifiche metiltransferasi e rimossa da demetilasi, fungendo da regolatore epigenetico critico nello sviluppo, differenziamento e malattia.

L'istone H3 si trova nel nucleo ed è associato ai cromosomi. Esistono multiple varianti, inclusa la canonica H3.1 (codificata da diversi geni, rappresentata da P68431) e la H3.1t specifica del testicolo (Q16695). Mentre H3.1 è espressa ubiquitariamente, H3.1t si trova prevalentemente nelle cellule testicolari. Riferimenti correlati: UniProt Q16695

Le code N-terminali degli istoni sono soggette a una vasta gamma di modifiche—acetilazione, metilazione, fosforilazione e molte altre—che generano un panorama regolatorio complesso. Studi di mappatura completi hanno catalogato queste modifiche, sottolineando la natura combinatoria intricata del codice istonico. Riferimenti correlati: PMID:17194708

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per il Western blot (WB) e il dot blot (DB), ci si aspetta una singola banda di circa 15 kDa. Lisati ricchi di istoni (es. proteine nucleari di HeLa estratte con acido) sono raccomandati come controlli positivi, e il caricamento dovrebbe essere normalizzato rispetto all'H3 totale.
• Nell'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) e ChIP‑seq, ottimizzare le condizioni di crosslinking e sonicazione per il tipo cellulare specifico. Includere loci noti positivi per H3K4me3 (es. promotore di GAPDH) e regioni di controllo negativo per validare l'arricchimento.
• Per l'immunoistochimica su sezioni incluse in paraffina (IHC‑P), il recupero dell'antigene (es. tampone citrato, pH 6.0) è essenziale. Dovrebbe essere osservato un pattern di colorazione prevalentemente nucleare, con l'intensità del segnale che riflette l'attività trascrizionale del tessuto.
• Negli ELISA e altri saggi su piastra, considerare l'uso di un peptide H3K4 trimetilato come controllo positivo e di un peptide non modificato o monometilato per confermare la specificità per la modifica.
• Come per qualsiasi anticorpo policlonale, la consistenza da lotto a lotto dovrebbe essere verificata mediante titolazione su campioni noti positivi. La reattività incrociata con altre specie è prevista in base all'elevata conservazione della sequenza tra i vertebrati, ma si consiglia la validazione nel sistema campione rilevante.

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