Anticorpo monoclonale di coniglio TriMetil-Istone H3-K4 (Q16695 / P68431) per la ricerca epigenetica e ChIP, WB, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Istone H3

• L'Istone H3 è un componente centrale del nucleosoma, che avvolge e compatta il DNA in cromatina per limitare l'accessibilità alla macchina trascrizionale, di riparazione e replicativa. Svolge un ruolo centrale nel mantenere la stabilità cromosomica e nel regolare l'espressione genica attraverso una complessa serie di modificazioni post‑traduzionali (il "codice istonico"). Riferimenti correlati: PMID:17194708
• La proteina canonica H3.1 (codificata da geni multipli HIST1H3, SWISS P68431) è espressa in modo dipendente dalla replicazione nella maggior parte dei tipi cellulari, mentre la variante specifica del testicolo H3.1t (HIST3H3, SWISS Q16695) è espressa prevalentemente nelle cellule testicolari. Entrambe si localizzano nel nucleo e si associano ai cromosomi durante la divisione cellulare. Riferimenti correlati: Gene/Proteina specifica; vedi UniProt Q16695/P68431
• La trimetilazione sulla lisina 4 (H3K4me3) è un marcatore epigenetico fondamentale associato a promotori attivi, conformazione cromatinica aperta e inizio trascrizionale. È depositata da metiltransferasi della famiglia COMPASS e riconosciuta da proteine "lettrici" che facilitano l'attivazione genica. Riferimenti correlati: PMID:16185088
• H3K4me3 coesiste e interagisce con altre modificazioni istoniche (es. acetilazione, fosforilazione, metilazione su altri residui) per modulare finemente gli stati della cromatina. La disregolazione di questo marcatore è implicata nel cancro, nei disturbi dello sviluppo e nella disfunzione immunitaria, rendendolo un biomarcatore chiave nella ricerca epigenetica e nello sviluppo IVD.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno (un peptide sintetico trimetilato intorno a K4) è stato progettato per conferire un'elevata specificità per la modificazione H3K4me3. Per confermare la selettività, considerare saggi di competizione con peptide o trattamento con demetilasi istoniche (es. LSD1) che rimuovono i gruppi metilici.
• Per il Western blot (WB), sono raccomandati protocolli di estrazione dell'istone che arricchiscono le proteine nucleari basiche. La banda attesa è di ~15 kDa; verificare l'identità della banda utilizzando controlli positivi per H3K4me3.
• Nell'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP), convalidare l'arricchimento su geni target noti di H3K4me3 (es. promotore di GAPDH) mediante qPCR. Includere appropriati controlli IgG per valutare il fondo.
• Per l'immunoistochimica (IHC‑P) e l'immunofluorescenza (IF/ICC), le condizioni di recupero dell'antigene (citrato pH 6 o EDTA pH 9) possono influenzare la colorazione. Testare un intervallo di diluizioni su tessuti positivi e negativi.
• A causa dell'elevata conservazione della sequenza tra le specie, è attesa una reattività incrociata con umano, topo, ratto e altri vertebrati. Convalidare il rilevamento nel proprio sistema campione specifico prima dell'analisi quantitativa.

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