Anticorpo monoclonale di coniglio TriMetil-Istona H3-K4 (Q16695/P68431) per ChIP-Seq, CUT&Tag, WB

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'Istona H3

Le istoni sono proteine basiche altamente conservate che costituiscono i componenti principali dei nucleosomi, le unità fondamentali della cromatina. L'Istona H3 è una delle cinque proteine istoniche principali coinvolte nella struttura della cromatina nelle cellule eucariotiche. Insieme a H2A, H2B e H4 forma l'ottamero istonico attorno al quale si avvolgono circa 147 paia di basi di DNA, compattando il genoma e regolando l'accessibilità al macchinario di trascrizione.

La dinamica dei nucleosomi, comprese le modifiche post-traduzionali (PTM) sulle code istoniche, svolge un ruolo cruciale nella regolazione epigenetica. L'Istona H3 è soggetta a numerose modifiche come metilazione, acetilazione, fosforilazione e altre, che costituiscono collettivamente il "codice istonico" che governa la struttura della cromatina e l'espressione genica.

Tra queste PTM, la trimetilazione della lisina 4 sull'istone H3 (H3K4me3) è un segno distintivo della trascrizione attiva. Si trova prevalentemente sui promotori dei geni trascritti attivamente ed è coinvolta nel reclutamento di complessi di rimodellamento della cromatina e fattori di trascrizione. L'anticorpo descritto qui riconosce specificamente la forma trimetilata di H3K4. Questa modificazione è mediata da metiltransferasi come i complessi MLL ed è associata all'attivazione genica. Riferimenti correlati: PMID:16267050 PMID:16457588 PMID:17194708

L'Istona H3.1t (codificata dal gene H3-4, accessione Q16695) è una variante specifica del testicolo dell'Istona H3.1, espressa nelle cellule testicolari. L'Istona H3.1 canonica (accessione P68431) è espressa nella maggior parte dei tessuti ed è codificata da più geni. Entrambe le varianti condividono un'elevata similarità di sequenza e sono componenti principali del nucleosoma.

La localizzazione subcellulare è esclusivamente nucleare, associata ai cromosomi.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico corrispondente alla lisina 4 trimetilata dell'Istona H3 umana. Per applicazioni come ChIP-seq, CUT&Tag o IF, si consiglia di includere un controllo negativo utilizzando peptide non trimetilato o un controllo isotipico per confermare la specificità.
• Si prevede che l'anticorpo abbia un'ampia reattività incrociata grazie all'elevata conservazione della coda N-terminale di H3 tra le specie. Tuttavia, si raccomanda la validazione nel sistema sperimentale specifico.
• Per Western blotting, dovrebbe essere rilevata una banda intorno a 15 kDa corrispondente all'istone H3. Assicurarsi di eseguire un'estrazione corretta delle istoni, in particolare quando si analizzano gli stati di metilazione.
• Nei saggi ChIP, la shearing ottimale della cromatina e la titolazione dell'anticorpo devono essere determinate empiricamente.
• Per applicazioni quantitative come ELISA o DB, si consiglia di utilizzare una curva standard con quantità note di peptide trimetilato.
• L'anticorpo può essere utilizzato in saggi multiplex con altri anticorpi contro modifiche istoniche per studiare il codice istonico in modo combinatorio.

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