Anticorpo Policlonale di Coniglio TriMetil-Istone H3-K64 (Q16695/P68431) (WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA)

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Istone H3

L'istone H3 è un componente centrale del nucleosoma, l'unità ripetitiva fondamentale della cromatina. I nucleosomi avvolgono e compattano il DNA, regolandone l'accessibilità alla macchineria cellulare necessaria per processi come la trascrizione, la riparazione del DNA, la replicazione del DNA e il mantenimento della stabilità cromosomica. Gli istoni svolgono quindi un ruolo centrale nell'organizzazione e nella funzione del genoma. L'accessibilità del DNA è controllata dinamicamente attraverso un complesso insieme di modificazioni post-traduzionali (PTM) sugli istoni, spesso indicate come il codice istonico, nonché attraverso attività di rimodellamento del nucleosoma.

Due isoforme sono rappresentate dagli accessi Swiss-Prot Q16695 e P68431. Q16695 (Istone H3.1t, noto anche come H3t o H3.4) è una variante istonica H3 specifica del testicolo espressa principalmente nelle cellule testicolari, dove probabilmente contribuisce alla riorganizzazione della cromatina durante la spermatogenesi. P68431 (Istone H3.1) è un istone canonico, dipendente dalla replicazione, ampiamente espresso e depositato sul DNA appena sintetizzato durante la fase S. Entrambe le isoforme condividono un'ampia omologia di sequenza e sono soggette a una moltitudine di PTM, tra cui metilazione, acetilazione, fosforilazione e altre, che modulano la struttura e la funzione della cromatina.

La trimetilazione della lisina 64 (K64) è un segnale epigenetico specifico all'interno della coda dell'istone H3, sebbene i suoi ruoli biologici precisi siano ancora in fase di chiarimento. Come altri eventi di metilazione istonica, si ritiene che influenzi l'espressione genica fungendo da sito di ancoraggio per proteine effettrici o alterando la compattazione della cromatina.

Riferimenti correlati: UniProt Q16695, UniProt P68431.

Guida Sperimentale e Suggerimenti Tecnici

• L'immunogeno utilizzato è un peptide sintetico trimetilato corrispondente alla regione circostante la lisina 64 dell'istone H3 (basato su NP_003520.1). Questo design consente il riconoscimento specifico dello stato trimetilato in questo residuo.
• Per il Western blot (WB), considerare l'uso di lisati cellulari totali da campioni di umano, topo, ratto o altri vertebrati. Il peso molecolare previsto di ~15 kDa dovrebbe essere confermato in condizioni riducenti e denaturanti.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P), potrebbero essere necessari metodi di recupero dell'antigene (ad esempio, recupero dell'epitopo indotto dal calore in tampone citrato) per smascherare l'epitopo. Convalidare la colorazione in tessuti di controllo positivi e negativi, tenendo conto dell'espressione specifica del testicolo dell'isoforma H3.1t.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), le condizioni ottimali di fissazione e permeabilizzazione dovrebbero essere determinate empiricamente. L'ampia reattività incrociata predetta rende questo anticorpo adatto per studi comparativi multispecie.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per rilevare peptidi o proteine ricombinanti H3-K64 trimetilati. Assicurarsi passaggi adeguati di blocco e lavaggio per ridurre al minimo il legame aspecifico.

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