pAb di coniglio anti-TrkB per WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q16620

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di TrkB

• Codificato dal gene NTRK2, TrkB (recettore dei fattori di crescita BDNF/NT-3, recettore tirosin-chinasico neurotrofico di tipo 2) è un recettore tirosin-chinasico che funge da recettore ad alta affinità per il fattore neurotrofico derivato dal cervello (BDNF) e la neurotrofina-4 (NTF4), e lega la neurotrofina-3 (NTF3) con affinità inferiore (PubMed:15494731, PubMed:7574684). Lo splicing alternativo genera molteplici isoforme, tra cui TrkB a lunghezza intera con attività chinasica, TrkB-T1 troncato e TrkB-T-Shc legante Shc. Riferimenti correlati: PMID:15494731 PMID:7574684
• A seguito della dimerizzazione indotta dal ligando e dell'autofosforilazione, TrkB recluta e attiva effettori a valle quali SHC1, FRS2, SH2B1, SH2B2 e PLCG1. Ciò attiva la cascata GRB2-Ras-MAPK (differenziazione neuronale e crescita dei neuriti), la via PI3K-AKT1 (crescita e sopravvivenza cellulare) e la segnalazione PLCG1-PKC (plasticità sinaptica).
• Attraverso PLCG1, TrkB attiva anche NF-kappa-B, promuovendo la trascrizione dei geni della sopravvivenza e sopprimendo l'anoikis. Può mediare la segnalazione del calcio dipendente dalle neurotrofine nelle cellule gliali.
• La localizzazione subcellulare comprende la membrana cellulare, le membrane degli endosomi/endosomi precoci, le proiezioni assonali e dendritiche, il citoplasma perinucleare e la densità postsinaptica.
• Nel SNC, TrkB è espresso nella corteccia cerebrale, nell'ippocampo, nel talamo, nel plesso coroideo, nel cervelletto, nel tronco encefalico e nel midollo spinale. Nel SNP, è presente nei gangli cranici, nei gangli delle radici dorsali e nei nervi sensitivi. TrkB-T1 è rilevato anche nel pancreas, nei reni e nel cuore, mentre TrkB-T-Shc è prevalentemente neuronale.
• Le modifiche post-traduzionali includono la glicosilazione N-linked, la formazione di legami disolfuro e la fosforilazione della tirosina dipendente dal ligando. Parole chiave: glicoproteina, fosfoproteina, chinasi, transmembrana, splicing alternativo.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 32–430 del TrkB umano, corrispondenti al dominio extracellulare. Si prevede che questa regione riconosca tutte le isoforme che condividono la regione extracellulare.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto del TrkB a lunghezza intera è di 92 kDa; tuttavia, la glicosilazione può causare uno spostamento della banda verso un peso molecolare apparente maggiore. Si raccomandano SDS-PAGE riducente e membrana PVDF.
• Nell'immunofluorescenza/ICC e nell'IHC-P, i metodi di recupero antigenico possono migliorare il rilevamento, soprattutto nei tessuti fissati in formalina e inclusi in paraffina. Validare l'anticorpo in campioni di controllo positivo appropriati (ad esempio tessuto cerebrale e linee cellulari neuronali) e includere controlli senza anticorpo primario.
• Poiché si tratta di un anticorpo policlonale, la coerenza tra lotti deve essere verificata per le applicazioni quantitative critiche. Valutare l'utilizzo come anticorpo di cattura o di rilevamento nell'ELISA, con un'adeguata ottimizzazione dell'abbinamento.

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