Anticorpo policlonale coniglio UBE2K per WB, WB, ELISA - P61086

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'UBE2K

• UBE2K (Enzima coniugante l'ubiquitina E2 K, noto anche come HIP2, E2-25K) è un enzima E2 che accetta l'ubiquitina dal complesso E1 e catalizza il suo attacco covalente alle proteine substrato, svolgendo un ruolo centrale nel sistema ubiquitina-proteasoma.
• Catalizza la sintesi di catene poliubiquitinate legate a Lys-48, che tipicamente indirizzano le proteine per la degradazione proteasomica. Questo enzima media la degradazione selettiva di proteine a breve vita e anormali, incluse quelle coinvolte nella degradazione associata al reticolo endoplasmatico (ERAD).
• UBE2K ubiquitina la huntingtina, la proteina implicata nella malattia di Huntington, e contribuisce alla formazione delle cellule schiumose promuovendo la degradazione di p53, sopprimendo così l'apoptosi nei macrofagi carichi di lipidi.
• Nelle infezioni virali, UBE2K viene dirottato per la degradazione della catena pesante di classe I del MHC e per la degradazione dipendente da HPV E7 di RB1, evidenziando il suo ruolo nell'evasione immunitaria e nella trasformazione oncogenica.
• La proteina è localizzata principalmente nel citoplasma, coerentemente con il suo ruolo negli eventi di ubiquitinazione citosolica.
• UBE2K subisce modificazioni post-traduzionali tra cui acetilazione e fosforilazione, che possono regolare la sua attività; lo splicing alternativo genera isoforme aggiuntive.
• È espresso ubiquitariamente nei tessuti umani, con alta espressione nel cervello, in particolare nella corteccia e nello striato, regioni colpite nei disturbi neurodegenerativi.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde a un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 1-100 dell'UBE2K umano, mirando alla regione N-terminale. Ci si aspetta reattività contro la proteina a lunghezza intera (22 kDa) nel Western blot.
• Per il Western blot, titolare l'anticorpo tra una diluizione di 1:500 e 1:2000 e ottimizzare in base al campione e al sistema di rilevamento. Utilizzare controlli positivi appropriati (es. lisato di cellule HeLa) e negativi.
• Questo anticorpo è validato per ELISA; per ELISA indiretta, determinare empiricamente la concentrazione ottimale dell'antigene di rivestimento e la diluizione dell'anticorpo.
• Dato che la reattività crociata è confermata solo per l'UBE2K umano, validare l'anticorpo in altre specie se necessario, poiché l'omologia di sequenza potrebbe permettere la reattività crociata.
• Gli anticorpi policlonali possono presentare variabilità da lotto a lotto; includere standard di riferimento interni per la riproducibilità.

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