Ubiquitina pAb di coniglio - P0CG47

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'Ubiquitina

• Codificata dal gene UBB, la poliubiquitina-B viene processata in più monomeri di ubiquitina che possono essere coniugati alle proteine bersaglio.
• L'attacco covalente dell'ubiquitina (monoubiquitinazione) o delle catene di poliubiquitina alle proteine regola diversi processi cellulari. I tipi di legame delle catene di poliubiquitina determinano i risultati funzionali: le catene legate in Lys-48 indirizzano i substrati alla degradazione proteasomiale; le catene legate in Lys-63 sono coinvolte nell'endocitosi, nelle risposte al danno del DNA e nella segnalazione di NF-kappa-B; le catene lineari partecipano alla segnalazione cellulare.
• La coniugazione dell'ubiquitina può avvenire anche attraverso altri legami (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33) con ruoli nella riparazione del DNA, nella degradazione associata all'ER, nelle risposte allo stress e nella modificazione delle chinasi.
• Le catene di poliubiquitina libere (non ancorate) funzionano in modo indipendente nell'attivazione delle chinasi e nella segnalazione intracellulare.
• La proteina si localizza nel citoplasma, nel nucleo e nella membrana esterna del mitocondrio.
• Le modificazioni post-traduzionali includono la fosforilazione e l'ADP-ribosilazione; inoltre, forma legami isopeptidici con le proteine bersaglio.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde all'ubiquitina full-length (1-228), quindi l'anticorpo può riconoscere sia l'ubiquitina libera che i coniugati di ubiquitina. Nel western blot, l'ubiquitina libera viene rilevata a ~26 kDa, mentre le proteine poliubiquitinate appaiono come macchie ad alto peso molecolare.
• Per la WB, se si analizza la degradazione, si consiglia di trattare le cellule con un inibitore del proteasoma (es. MG132) per accumulare le specie poliubiquitinate.
• Convalidare la specificità con controlli negativi appropriati, come l'abbattimento dell'ubiquitina mediato da siRNA.
• Per IHC-P, potrebbe essere necessario il recupero dell'antigene; ottimizzare la diluizione dell'anticorpo e le condizioni di rilevazione utilizzando tessuti positivi noti.
• Le applicazioni ELISA possono trarre vantaggio dalla sperimentazione di entrambi i formati, diretto e sandwich, a seconda del tipo di campione.

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