Anticorpo monoclonale coniglio USP9X per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q93008

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di USP9X

• USP9X (Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 9X), noto anche come FAF, FAM, hFAM, DFFRX, MRX99, è una grande enzima deubiquitinasi codificata dal gene USP9X localizzato sul cromosoma X. Appartiene alla famiglia delle peptidasi C19 delle proteine specifiche per l'ubiquitina.
• Agendo come tiolproteasi, USP9X idrolizza specificamente le catene di poliubiquitina con una preferenza per i legami Lys-11, seguiti da legami Lys-63, Lys-48 e Lys-6, rimuovendo quindi l'ubiquitina dalle proteine bersaglio e regolando il turnover proteico. Riferimenti correlati: PMID:30914461
• USP9X è una componente essenziale della cascata di segnalazione TGF-beta/BMP, dove deubiquitina SMAD4 monoubiquitinato, opponendosi all'E3 ubiquitina-proteina ligasi TRIM33 e promuovendo la trasduzione del segnale. Riferimenti correlati: PMID:19135894
• In mitosi, USP9X regola l'allineamento e la segregazione dei cromosomi controllando la localizzazione di BIRC5/survivina ai centromeri mitotici, garantendo così una corretta divisione cellulare. Riferimenti correlati: PMID:16322459
• USP9X deubiquitina e stabilizza molteplici proteine coinvolte nella riparazione del DNA (ALKBH3), la demetilazione dell'RNA (ALKBH5) e l'assemblaggio del complesso mTORC2 (RICTOR), evidenziando il suo ruolo nel mantenimento dell'omeostasi cellulare. Riferimenti correlati: PMID:25944111 PMID:37454738 PMID:33378666
• L'enzima partecipa anche all'importazione perossisomiale deubiquitinando PEX5, ripristina l'orologio circadiano attraverso la stabilizzazione di BMAL1 e inibisce la via di segnalazione Hippo tramite la deubiquitinazione di AMOTL2. Riferimenti correlati: PMID:22371489 PMID:29626158 PMID:26598551 PMID:34404733
• Subcellularmente, USP9X si localizza nel citosol, nei coni di crescita e nell'assonema del ciglio, in linea con i suoi ruoli nello sviluppo neuronale e nella migrazione cellulare.
• Espresso ampiamente nei tessuti embrionali e adulti, le mutazioni di USP9X sono associate alla disabilità intellettiva X-linked (MRX99, XLID99), sottolineando la sua importanza nel neurosviluppo.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa 1-100) di USP9X umano; l'anticorpo può riconoscere sia USP9X full-length che eventuali frammenti N-terminali. Tenere conto di questo aspetto nell'interpretazione dei pattern di bande in Western blot.
• A causa dell'alto peso molecolare di USP9X (~290 kDa), utilizzare gel SDS-PAGE a bassa percentuale (es. 6%) e tempi di trasferimento in blotto umido prolungati (es., durante la notte a 4°C) per ottenere una risoluzione e un trasferimento ottimali in WB.
• Per IHC-P e IF/ICC, sono raccomandate le tecniche standard di recupero dell'antigene (citrato mediato da calore o tampone EDTA), ma le condizioni di fissazione devono essere validate per il specifico tipo di campione.
• In ELISA, il peptide sintetico immunogeno può essere utilizzato come controllo positivo; tuttavia, la reattività crociata con USP9X di topo e ratto deve essere verificata se si utilizzano campioni di roditori.

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