Anticorpo Policlonale di Coniglio contro Vinculina per WB, IF/ICC, ELISA - P18206

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Vinculina

• La Vinculina è una proteina legante i filamenti di actina (F-actina) che svolge un ruolo centrale sia nell'adesione cellula-matrice (adesioni focali) che nell'adesione cellula-cellula (giunzioni aderenti).
• Potenzia la meccanosensibilità regolando l'espressione della E-caderina sulla superficie cellulare e stabilizzando il complesso della E-caderina, contribuendo alla morfologia e alla locomozione cellulare.
• La proteina si localizza in molteplici siti subcellulari, tra cui adesioni focali, giunzioni aderenti, podosomi, il citoscheletro perinucleare e il sarcolemma nelle cellule muscolari.
• Una variante di splicing specifica del muscolo, la metavinculina (MV), deriva dallo splicing alternativo del gene VCL e incorpora un esone aggiuntivo, portando a un isoforma più grande con funzioni uniche nel muscolo cardiaco e liscio.
• Modificazioni post-traduzionali come fosforilazione, acetilazione e palmitoilazione regolano l'attivazione, il targeting e le interazioni proteiche della vinculina.
• Mutazioni in VCL sono associate a cardiomiopatie, inclusa la cardiomiopatia dilatativa (CMD1W) e la cardiomiopatia ipertrofica (CMH15), sottolineando il suo ruolo critico nell'integrità del muscolo cardiaco.
• La Vinculina funge da hub per numerosi partner di legame (es. talina, α-actinina, paxillina), integrando segnali meccanici e chimici nei siti di adesione.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione C-terminale (amminoacidi 751–850), che è conservata tra vinculina e metavinculina; pertanto si prevede che l'anticorpo riconosca entrambi gli isoforme salvo diversa indicazione.
• Per il western blotting, è attesa una banda vicina a 124 kDa; validare la specificità utilizzando lisati di linee cellulari umane, murine o di ratto note per esprimere vinculina (es. HeLa, NIH/3T3 o C2C12).
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica, ottimizzare la fissazione (es. paraformaldeide al 4%) e la permeabilizzazione per preservare le strutture delle adesioni focali; una colorazione coppia con F-actina o paxillina può servire come controllo positivo.
• Per l'ELISA, considerare un formato diretto o sandwich; eseguire esperimenti di titolazione per determinare le concentrazioni ottimali di rivestimento e anticorpo per il proprio sistema di piastra e rilevazione specifico.
• Quando si lavora con tessuti muscolari, tenere presente che la metavinculina migra a un peso molecolare più elevato e può mostrare un'espressione differenziale; includere controlli appropriati.

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