mAb di coniglio anti-WNK3 - Q9BYP7

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di WNK3

• WNK3 è una serina/treonina-protein chinasi della famiglia WNK (With No Lysine), designata anche come PRKWNK3. Svolge un ruolo chiave a monte della cascata delle chinasi WNK-SPAK/OSR1.
• WNK3 regola l’omeostasi elettrolitica e il recupero del volume cellulare fosforilando e attivando le chinasi a valle OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK in risposta allo stress iperosmotico. Riferimenti correlati: PMID:16275911 PMID:16275913 PMID:16501604 PMID:22989884
• In condizioni iperosmotiche, WNK3 agisce come sensore dell’affollamento molecolare, sottoponendosi a separazione di fase liquido-liquido per formare compartimenti privi di membrana che concentrano la chinasi con i suoi substrati, favorendo così una trasduzione efficiente del segnale. Riferimenti correlati: PMID:36318922
• Le chinasi OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK attivate fosforilano successivamente i cotrasportatori catione-cloruro: attivando i cotrasportatori Na-K-Cl (ad esempio SLC12A2/NKCC1) e inibendo i cotrasportatori K-Cl (ad esempio SLC12A4/KCC1, SLC12A5/KCC2, SLC12A6/KCC3), che insieme mediano l’aumento regolatorio del volume cellulare. Riferimenti correlati: PMID:16275911 PMID:16275913 PMID:16357011
• WNK3 fosforila anche WNK4, modulando potenzialmente l’attività di NCC (SLC12A3), e può fosforilare NEDD4L. Indipendentemente dalla sua attività chinasica, WNK3 può agire come proteina scaffold per regolare negativamente la localizzazione sulla membrana di canali quali KCNJ1 e SLC26A9. Riferimenti correlati: PMID:16357011 PMID:17975670 PMID:20525693 PMID:17673510
• WNK3 potenzia l’afflusso di calcio mediato da TRPV5 e TRPV6 aumentando i loro livelli di espressione sulla membrana attraverso un meccanismo dipendente dalla chinasi. Riferimenti correlati: PMID:18768590
• La proteina è localizzata prevalentemente nel citoplasma.
• WNK3 è ampiamente espresso nel cervello adulto, nei polmoni, nei reni, nel fegato e nel pancreas, nonché nei tessuti fetali. L’isoforma 1 è specifica del cervello, mentre l’isoforma 3 è specifica del rene. Le mutazioni di WNK3 sono state associate a disabilità intellettiva.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L’immunogeno corrisponde a un peptide C-terminale (amminoacidi 1700-1800), diretto contro una regione che potrebbe essere ben esposta e adatta al rilevamento della proteina a lunghezza intera.
• Per il Western blot, si consiglia di utilizzare un gel SDS-PAGE a bassa percentuale (ad esempio, 6–8%) per separare efficacemente la grande proteina WNK3 da 198 kDa e di includere marcatori di peso molecolare appropriati.
• La reattività crociata dell’anticorpo con topo e ratto suggerisce la presenza di un epitopo conservato; tuttavia, si raccomanda la validazione nella specie e nel sistema di campioni pertinenti.
• L’anticorpo è adatto per IHC-P ed ELISA oltre che per WB; si consiglia di ottimizzare i metodi di recupero antigenico e le diluizioni dell’anticorpo per ciascuna applicazione e tipologia di tessuto.
• Poiché la segnalazione di WNK3 viene attivata in condizioni di stress iperosmotico, si può considerare il pretrattamento di cellule o tessuti con stimoli iperosmotici (ad esempio, saccarosio) per aumentare il rilevamento dei bersagli a valle fosforilati durante la valutazione dell’attivazione della via.

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