Anticorpo monoclonale di coniglio ZAP70 per WB, IF-P, ELISA - P43403

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di ZAP70

• La tirosin-proteina chinasi ZAP-70 (proteina associata alla catena zeta da 70 kDa, tirosin-chinasi correlata a Syk) è codificata dal gene ZAP70 e esiste in isoforme alternativamente splicitate.
• Agisce come chinasi di segnalazione essenziale nella risposta immunitaria adattativa: regola l'attivazione, la proliferazione, la differenziazione, la motilità, l'adesione e l'espressione di citochine delle cellule T; contribuisce inoltre allo sviluppo dei timociti e all'attivazione primaria delle cellule B.
• Dopo la stimolazione del recettore delle cellule T (TCR), ZAP70 viene reclutata verso i motivi ITAM fosforilati di CD3E e CD3Z sulla membrana plasmatica, dove viene attivata dalla fosforilazione mediata da LCK. ZAP70 attivata fosforila le proteine adattatrici LAT e LCP2, avviando cascate di segnalazione a valle. Riferimenti correlati: PMID:7509083
• Media l'internalizzazione e la degradazione del complesso TCR interagendo con l'E3 ubiquitina ligasi CBL e gli adattatori SLA/SLA2, modulando l'espressione superficiale del TCR e la durata della segnalazione.
• Localizzazione subcellulare: citoplasma e membrana cellulare; trasloca verso la membrana plasmatica dopo il legame con il TCR.
• Specificità tissutale: espresso in cellule T, cellule natural killer, timociti precoci e pro/pre cellule B.
• Modifiche post-traduzionali: fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione regolano la sua attività e stabilità. Contiene domini SH2 e un dominio chinasi. Parole chiave: struttura 3D, fosfoproteina, coniugazione Ubl, legame isopeptidico, variante patologica, SCID.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è una proteina di fusione ricombinante che rappresenta gli amminoacidi 550-619 all'interno del dominio chinasi C-terminale di ZAP70 umano. Per Western blot, è prevista una banda specifica intorno a 70 kDa in linee di cellule T umane (es. Jurkat) o cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC).
• Per l'immunofluorescenza (IF-P), è richiesta la permeabilizzazione per rilevare ZAP70 intracellulare e associato alla membrana; si consiglia di utilizzare attivatori delle cellule T per aumentare il segnale.
• Nelle applicazioni ELISA, validare le prestazioni dell'anticorpo con proteina ZAP70 ricombinante o lisati cellulari da campioni di cellule T rilevanti; titolare in modo ottimale.
• La reattività crociata riportata è riferita all'uomo. Se si testano altre specie, verificare la conservazione della sequenza della regione dell'immunogeno, in particolare nel dominio chinasi.

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