Anticorpo policlonale anti-DARS di coniglio per WB, IHC-P, IP, ELISA - P14868

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del DARS

• Il DARS, noto anche come aspartil-tRNA sintetasi (AspRS) e proteina 40 induttrice della proliferazione cellulare, è codificato dal gene DARS1 nell'uomo. Appartiene alla famiglia delle aminoacil-tRNA sintetasi di classe II, che svolge un ruolo fondamentale nella traduzione proteica.
• L'enzima catalizza l'attacco specifico dell'aspartato al suo tRNA cognato in una reazione in due fasi: l'aspartato viene prima attivato dall'ATP per formare aspartil-AMP, e poi trasferito all'estremità accettrice del tRNA, un passaggio critico per una sintesi proteica citoplasmatica accurata.
• Predominantemente localizzato nel citosol, il DARS è essenziale per fornire aspartil-tRNA per la traduzione ribosomiale, influenzando direttamente la manutenzione e la crescita del proteoma cellulare.
• L'analisi dell'espressione specifica dei tessuti mostra livelli elevati nel cervello in sviluppo e adulto, in particolare nelle zone ventricolari/subventricolari, nei sottocampi dell'ippocampo e nella corteccia cerebrale, con un'espressione preferenziale neuronale. I neuroni periferici nel colon esprimono anch'essi DARS.
• Studi proteomici hanno identificato acetilazione e fosforilazione del DARS, modifiche post-traduzionali che possono modulare la sua attività enzimatica, la distribuzione subcellulare o le interazioni proteina-proteina.
• Le mutazioni patogene nel DARS sono associate alla leucoencefalopatia con coinvolgimento del tronco encefalico e del midollo spinale e elevazione del lattato (HBSL), un grave disturbo neurologico, sottolineando il ruolo critico dell'enzima nel sistema nervoso centrale.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• La sequenza immunogena (aa 222–501) risiede all'interno di un dominio catalitico conservato del DARS; questa regione condivide un'alta identità tra umano, topo e ratto, supportando la reattività crociata osservata.
• Per il Western blotting, il peso molecolare previsto è di ~57 kDa. Si consiglia di validare l'anticorpo utilizzando controlli positivi come lisati di HeLa, HEK293 o cervello di topo/ratto, e di considerare sia condizioni riducenti che non riducenti.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), il recupero ottimale dell'antigene e la diluizione dell'anticorpo devono essere determinati empiricamente. Il DARS è altamente espresso nei tessuti cerebrali; pertanto, si raccomandano sezioni di cervello umano o di roditore per la validazione iniziale.
• Quando si esegue l'immunoprecipitazione, la natura policlonale dell'anticorpo può migliorare la cattura dei complessi nativi di DARS. Includere controlli di isotipo appropriati e passaggi di pre-pulizia per ridurre il rumore di fondo.
• Per le applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento. Sono raccomandati saggi di titolazione e reattività crociata contro sintetasi strettamente correlate per garantire la specificità.
• I modelli di knockdown o knockout possono servire come controlli negativi per confermare la specificità dell'anticorpo, specialmente nelle applicazioni quantitative in cui è necessaria una quantificazione precisa.

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