Anticorpo Policlonale Anti-DNA polimerasi eta per WB - Q9Y253

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della DNA polimerasi eta

• La DNA polimerasi eta (POLH), anche nota come proteina RAD30A o XP-V, è una DNA polimerasi della famiglia Y specializzata nella sintesi translesionale (TLS) attraverso i dimeri di ciclobutapirimidine indotti dai raggi UV e altre lesioni distorte. Riferimenti bibliografici: PMID:10385124, PMID:11743006, PMID:16357261
• Collabora con il complesso POLZ (REV3L-REV7-POLD2-POLD3) per estendere i primer dopo l'elusione della lesione, inserendo uno o due nucleotidi di fronte al sito danneggiato. Riferimenti bibliografici: PMID:24449906
• POLH indirizza la DNA polimerasi iota (POLI) verso i foci di replicazione, facilitando una risposta coordinata al danno. Riferimenti bibliografici: PMID:12606586
• In corrispondenza dei siti abasici, POLH forma una base di Schiff con il 5′-desossiribosio fosfato, intrappolando covalentemente l'enzima e inibendo la sua sintesi di DNA per prevenire la mutagenesi durante la riparazione per escissione di basi. Riferimenti bibliografici: PMID:14630940
• La proteina si localizza nel nucleo e si arricchisce nei foci di replicazione dopo il danno al DNA.
• POLH è soggetta a ubiquitinazione, formando legami isopeptidici che modulano il suo reclutamento e la sua attività.
• Le mutazioni in POLH sono responsabili della variante di xeroderma pigmentoso (XP-V), una patologia recessiva caratterizzata da estrema sensibilità ai raggi UV e un alto rischio di cancro della pelle.
• Svolge anche un ruolo nell'ipermutazione somatica dei geni delle immunoglobuline, contribuendo alla diversità anticorpale. Riferimenti bibliografici: PMID:11376341, PMID:14734526

Indicazioni Sperimentali e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione centrale (aa 322–520) della POLH umana, che contiene domini conservati critici per l'attività polimerasica e l'elusione della lesione.
• Per Western blot (WB), è prevista una banda specifica a circa 78 kDa nei lisati nucleari di linee cellulari umane, murine o di ratto.
• Per immunofluorescenza (IF/ICC), ottimizzare la fissazione e la permeabilizzazione per rilevare i foci nucleari, che aumentano dopo il trattamento con UV.
• Per ELISA, pre-rivestire con la proteina immunogena o utilizzare un approccio di rivestimento diretto, e prevedere un passaggio di blocco per minimizzare il segnale di fondo.
• Convalidare la specificità dell'anticorpo in campioni trattati con knockout o siRNA per confermare il riconoscimento del bersaglio.

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