Anticorpo monoclonale Anti-DNA Polimerasi gamma per WB, ELISA - P54098

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della DNA Polimerasi gamma

• La subunità gamma-1 della DNA polimerasi (POLG) è il nucleo catalitico della DNA polimerasi mitocondriale, responsabile della replicazione dell'intero genoma mitocondriale. Sintetizza sia il filamento pesante che quello leggero utilizzando come stampo DNA a singolo filamento e primer di RNA, funzionando come replisoma altamente processivo insieme all'elicasi TWNK e SSBP1. Riferimenti correlati: PMID:11477093, PMID:11897778, PMID:15917273
• POLG possiede un'attività di proofreading da esonucleasi 3'→5' che corregge sostituzioni di basi, aggiunte e delezioni di singole basi, garantendo un'elevata fedeltà durante la replicazione del mtDNA. Quando si verifica una misincorporazione, l'enzima passa alla modalità di editing nucleolitico per rimuovere il nucleotide errato. Riferimenti correlati: PMID:10827171, PMID:11477094, PMID:11504725
• Dopo aver completato la sintesi del mtDNA, POLG media la degradazione esonucleolitica 3'→5' nella nicchia per facilitare la corretta ligazione, e mostra anche attività 5'-desossiribosio fosfato (dRP) liasi, che le permette di partecipare alla via di riparazione mitocondriale per escissione delle basi. Riferimenti correlati: PMID:9770471, PMID:11477093, PMID:15167897
• Le mutazioni del gene POLG sono associate a un ampio spettro di malattie mitocondriali, tra cui oftalmoplegia esterna progressiva (PEO), neuropatie, epilessia e sindrome di Leigh. È un gene primario per le malattie mitocondriali associato alle sindromi da depletion e delezione del DNA mitocondriale.
• La proteina si localizza nella matrice mitocondriale ed è un componente del nucleoide mitocondriale, dove si associa al mtDNA per facilitare la replicazione e il mantenimento.
• POLG è un enzima grande e multifunzionale (circa 140 kDa) che appartiene alla famiglia delle DNA polimerasi di tipo A. Richiede ioni magnesio per le sue attività di polimerasi ed esonucleasi.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno utilizzato per produrre questo anticorpo corrisponde a un peptide della regione C-terminale (amminoacidi 1140–1239) della POLG umana. Questo epitopo si trova al di fuori dei domini catalitici e può fornire riconoscimento sia della forma wild-type che di alcune forme mutanti. Tuttavia, per ogni sistema sperimentale, verificare l'accessibilità dell'epitopo in condizioni native e denaturanti.
• Per Western blot, il peso molecolare previsto è 140 kDa. Utilizzare una percentuale di gel e condizioni di trasferimento appropriate per proteine ad alto peso molecolare, e includere un controllo positivo come lisati mitocondriali di cellule umane o murine.
• La reattività crociata con la POLG di topo è stata confermata, rendendo questo anticorpo adatto per studi su modelli murini di malattie mitocondriali. Grazie all'elevata conservazione della sequenza, è possibile la reattività crociata con altre specie, ma questa deve essere validata empiricamente.
• Per ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento. Titrare l'anticorpo per determinare la concentrazione di lavoro ottimale e assicurarsi che l'antigene di coating contenga l'epitopo C-terminale o un frammento ricombinante di POLG che copra la regione dell'immunogeno.
• Si noti che l'espressione di POLG è ubiquitaria ma arricchita nei tessuti con elevato fabbisogno energetico. Valutare la sensibilità di rilevamento nei sistemi di campioni pertinenti, come preparazioni mitocondriali di fegato, muscolo o cervello.

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