Anticorpo monoclonale anti-DNA topoisomerasi I (TOP1) per WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P11387

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della DNA topoisomerasi I

• La DNA topoisomerasi 1 (TOP1) è un enzima monomerico codificato dal gene TOP1 (GeneID: 7150). È nota anche come DNA topoisomerasi I ed è classificata come una topoisomerasi di tipo IB.
• TOP1 risolve il superavvolgimento del DNA e la tensione torsionale generata durante la replicazione e la trascrizione clivando e riunendo transientemente un filamento del duplex di DNA, permettendo una rotazione controllata del filamento interrotto attorno a quello integro (Per similarità).
• TOP1 forma un intermedio covalente DNA-(3′-fosfotirosil)-enzima attraverso transesterificazione, e quindi religa il DNA dopo la rimozione del superavvolgimento; questa attività è essenziale per il metabolismo del DNA.
• Oltre al suo ruolo canonico, TOP1 regola lo splicing alternativo del pre-mRNA del fattore tissutale (F3) nelle cellule endoteliali ed è coinvolta nella trascrizione circadiana modulando la struttura della cromatina al promotore BMAL1.
• La proteina si localizza nel nucleo, specificamente nel nucleolo e nel nucleoplasma, coerente con i suoi ruoli nella trascrizione e replicazione del DNA.
• TOP1 subisce varie modificazioni post-traduzionali tra cui acetilazione e fosforilazione, ed è un substrato per la coniugazione simile all'ubiquitina.
• È espressa nelle cellule endoteliali ed è stata implicata nei riarrangiamenti cromosomici e nelle interazioni ospite-virus, evidenziando il suo più ampio significato biologico e clinico.
• Il peso molecolare calcolato è di circa 91 kDa, che si allinea con la banda osservata nel western blotting.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'anticorpo è stato prodotto contro un peptide N-terminale (aa 1–100); pertanto, ci si aspetta che riconosca il TOP1 a lunghezza intera e possa anche rilevare varianti N-terminali. Verificare la specificità nel sistema sperimentale pertinente.
• TOP1 è prevalentemente nucleare; sono raccomandati efficaci protocolli di estrazione nucleare e fissazione/permeabilizzazione (es. trattamento con Triton X-100) per IHC-P e IF/ICC.
• Per WB, utilizzare condizioni riducenti; la banda prevista appare vicino a 91 kDa. Includere appropriati controlli positivi come lisati di cellule HeLa o endoteliali.
• Questo anticorpo monoclonale di coniglio offre alta specificità e basso fondo; tuttavia, le diluizioni ottimali dell'anticorpo dovrebbero essere determinate empiricamente per ogni applicazione e tipo di campione.
• I protocolli IP ed ELISA potrebbero richiedere l'ottimizzazione della concentrazione dell'anticorpo e delle condizioni di incubazione; considerare il cross-linking dell'anticorpo alla resina per IP.

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