Anticorpo monoclonale di coniglio anti-eIF4E [Validato KD] per WB, IF/ICC, IP, ELISA - P06730

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di eIF4E

• Il fattore 4E di inizio della traduzione eucariotica (eIF4E), noto anche come eIF4E1, subunità da 25 kDa di eIF-4F o proteina legante il cappuccio dell'mRNA, è codificato dal gene EIF4E (ID del gene: 1977). Svolge funzioni duplice nel citoplasma, per l'inizio della traduzione, e nel nucleo, per l'esportazione dell'mRNA (PubMed:11606200, PubMed:22578813, PubMed:22684010).
  Riferimenti correlati:
  PMID:11606200, PMID:22578813, PMID:22684010

• eIF4E riconosce e lega specificamente il cappuccio 7-metilguanosina (m7G) all'estremità 5' degli mRNA, un passaggio fondamentale che facilita il reclutamento dei ribosomi e lo svolgimento delle strutture secondarie dell'mRNA (PubMed:16271312, PubMed:22578813). Insieme a EIF4G1, consente la traduzione dipendente dall'elemento TISU, aggirando la necessità della scansione ribosomiale (PubMed:29987188).
  Riferimenti correlati:
  PMID:16271312, PMID:22578813, PMID:29987188

• Oltre all'inizio della traduzione, eIF4E regola la stabilità e l'immagazzinamento citoplasmatici dell'mRNA. Nei P-body, partecipa a un complesso che sequestra gli mRNA repressi a livello traduzionale, impedendone la degradazione (PubMed:24335285).
  Riferimenti correlati:
  PMID:24335285

• eIF4E facilita l'esportazione nucleare di un sottoinsieme di mRNA, tra cui NOS2/iNOS e MDM2, attraverso interazioni con l'elemento 4ESE e la via di esportazione LRPPRC–XPO1, influenzando così processi quali l'apoptosi e la progressione del ciclo cellulare (PubMed:23471078, PubMed:22684010).
  Riferimenti correlati:
  PMID:23471078, PMID:22684010

• A livello subcellulare, eIF4E si localizza nel citoplasma, nei P-body, nei granuli di stress e nel nucleo (compresi gli speckle nucleari e i corpi nucleari), riflettendo i suoi molteplici ruoli.

• eIF4E è soggetto a fosforilazione (ad esempio in Ser209), che modula la sua affinità di legame al cappuccio e l'attività traduzionale. È stata inoltre segnalata l'acetilazione e la proteina è sottoposta a splicing alternativo, producendo isoforme con masse molecolari di circa 25–29 kDa.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno, un peptide sintetico che comprende i residui 1–100 dell'eIF4E umano (NP_001959.1), ha come bersaglio la regione N-terminale conservata. Sulla base dell'omologia di sequenza, è prevista la reattività crociata con gli ortologhi di topo, ratto e scimmia, come confermato dal fornitore.
• Nel western blot (WB), si prevedono bande corrispondenti alle isoforme da 25 kDa, 27 kDa e 29 kDa; i controlli di caricamento e le condizioni di blocco devono essere ottimizzati in base al tipo di campione.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), eIF4E mostra tipicamente un segnale citoplasmatico diffuso con colorazione nucleare punteggiata; i protocolli di fissazione e permeabilizzazione potrebbero richiedere modifiche in base alla linea cellulare.
• Questo anticorpo è validato per l'immunoprecipitazione (IP) e l'ELISA; per i saggi quantitativi, includere controlli positivi e negativi appropriati.
• Poiché eIF4E partecipa a molteplici complessi, l'IP in condizioni native può co-precipitare i partner di interazione; per isolare l'eIF4E totale è possibile utilizzare condizioni di lisi denaturanti.

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