Anticorpo policlonale coniglio SARS-CoV-2 NSP8 per WB, ELISA - P0DTC2

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della glicoproteina Spike

• La glicoproteina Spike (proteina S, nota anche come E2, proteina Peplomer) è un antigene di superficie principale del SARS-CoV-2, essenziale per l'ingresso del virus nelle cellule ospiti. Esiste come omotrimero ed è scissa in subunità S1 (legame del recettore) e S2 (fusione della membrana). Riferimenti correlati: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086

• La subunità S1 si attacca ai recettori dell'ospite, principalmente l'enzima di conversione dell'angiotensina 2 (ACE2), innescando l'infezione. Il legame provoca cambiamenti conformazionali che portano alla fusione della membrana, direttamente sulla superficie cellulare o dopo l'endocitosi. Riferimenti correlati: PMID:34561887 PMID:32075877 PMID:32221306 PMID:34903715

• Recettori alternativi, come la neuropilina-1 (NRP1) e NRP2, le integrine o ASGR1, possono mediare l'ingresso in modo indipendente dall'ACE2, spiegando potenzialmente il tropismo virale nell'epitelio olfattivo con bassa espressione di ACE2. Riferimenti correlati: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059

• La scissione della proteina S nel sito S2/S2' da parte di proteasi ospiti, inclusa TMPRSS2 sulla superficie cellulare o la catepsina L negli endosomi, è essenziale per l'attivazione del meccanismo di fusione e il rilascio del genoma virale nel citoplasma. Riferimenti correlati: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616

• Come proteina di fusione virale di classe I, S2 subisce un cambiamento conformazionale irreversibile da uno stato pre-fusione a una struttura a forcina post-fusione, mediato da regioni ripetute eptadiche che formano un trimero di forcine, guidando la fusione della membrana. Riferimenti correlati: PMID:34561887

• Studi strutturali rivelano che il dominio del gambo di S contiene cerniere flessibili, permettendo libertà orientamentale della testa, il che potrebbe facilitare il coinvolgimento del recettore e l'evasione immunitaria. Riferimenti correlati: PMID:32817270

• La proteina Spike è situata sulla membrana del virione, sulla membrana del compartimento intermedio tra reticolo endoplasmatico e apparato di Golgi dell'ospite e sulla membrana cellulare dell'ospite. Subisce estese modifiche post-traduzionali inclusa la glicosilazione e la palmitoilazione, ed è un fattore chiave di virulenza.

• Le parole chiave funzionali principali includono attacco virale alla cellula ospite, fusione della membrana virale con quella dell'ospite, proteina dell'involucro virale, membrana cellulare dell'ospite, inibizione della risposta immunitaria innata dell'ospite, superantigene e immunoevasione virale.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è una proteina di fusione ricombinante corrispondente agli amminoacidi 1-198 di NSP8 SARS-CoV-2 (YP_009742615.1). Per il Western blot (WB), considerare l'uso di controlli positivi appropriati come lisati di cellule infette da SARS-CoV-2 o NSP8 ricombinante. Si raccomanda l'ottimizzazione della diluizione dell'anticorpo e delle condizioni di rilevamento.
• Per l'ELISA, assicurarsi di un rivestimento appropriato con l'immunogeno o peptidi derivati da NSP8 rilevanti. Validare il saggio con controlli sierici positivi e negativi. La natura policlonale può fornire un rilevamento sensibile ma potrebbe richiedere una titolazione accurata per minimizzare il fondo.
• Poiché la reattività crociata è confermata per SARS-CoV-2, l'anticorpo potrebbe rilevare NSP8 da varianti di SARS-CoV-2, ma è consigliato eseguire test specifici sulla variante. Considerare il mappaggio dell'epitopo se è necessaria una reattività precisa.

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